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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于免疫组化（IHC）的问题
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shiysh

木虫 (小有名气)

[求助] 关于免疫组化（IHC）的问题

前几天做IHC，用的一抗分别抗小鼠和抗兔的，各五个抗体。结果小鼠的抗体全都没有表达，兔子的全部表达了。理论上应该是无论是抗小鼠还是抗兔都表达的。因为是之前的block，从新切的片，本来是打算拿来做positive control的。刚开始以为是二抗出了问题，今天换了一个kit，发现依旧是小鼠的抗体都不表达，兔子的都表达。感觉很是诡异。请问各位大侠是什么原因？
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1楼 2013-04-21 13:48:58
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, MolEPI+1, 应助指数+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-21 16:08:53
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 学习了 2013-04-21 18:21:38
shiysh: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-04-22 01:43:39
这个问题可能是与影响抗原免疫应答的因素有关：
包括抗原分子的理化因素、的宿主因素和抗原进入动物机体的方式三方面。
1.抗原分子的理化因素
化学性质、分子质量大小、结构复杂性、易接近型、聚合状态还是单体状态。
2.宿主因素
（1）遗传因素：各种物种的不同，同一物种不同个体，对同一抗原的免疫应答与是否免疫应答的程度不同。而且在各种遗传因素中，NHC是涉及到免疫应答的质和量的最主要因素。
（2）同一物种不同个体的年龄、性别与健康状况也对免疫应答的质和量有影响。一般地，青壮年动物对免疫应答的质和量高，雌性动物比雄性动物生成的抗体多。
3.抗原进入动物机体的方式
（1）抗原进入动物机体的数量：抗原的剂量要适中，剂量太高或者太低都会诱导免疫耐受。
（2）免疫途径：按免疫应答强度从高到低，皮内免疫>皮下免疫>腹腔注射=静脉注射。
（3）两次免疫之间的时间间隔和次数。
（4）使用免疫佐剂：弗氏试剂诱导IgG类抗体产生；明矾试剂诱导IgE类抗体产生。
这些原理你可以参考，然后调整你的protocols.  Good Luck !
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2楼2013-04-21 14:43:46
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

具体的protocols，你可以参考：G.C.霍华德 M.R.凯瑟 著，张全庚 等译，抗体制备与实验指南，科学出版社，2010.
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3楼2013-04-21 14:49:54
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