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shiysh木虫 (小有名气)
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[求助]
关于免疫组化（IHC）的问题
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| 前几天做IHC，用的一抗分别抗小鼠和抗兔的，各五个抗体。结果小鼠的抗体全都没有表达，兔子的全部表达了。理论上应该是无论是抗小鼠还是抗兔都表达的。因为是之前的block，从新切的片，本来是打算拿来做positive control的。刚开始以为是二抗出了问题，今天换了一个kit，发现依旧是小鼠的抗体都不表达，兔子的都表达。感觉很是诡异。请问各位大侠是什么原因？ |
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这个问题可能是与影响抗原免疫应答的因素有关： 包括抗原分子的理化因素、的宿主因素和抗原进入动物机体的方式三方面。 1.抗原分子的理化因素 化学性质、分子质量大小、结构复杂性、易接近型、聚合状态还是单体状态。 2.宿主因素 （1）遗传因素：各种物种的不同，同一物种不同个体，对同一抗原的免疫应答与是否免疫应答的程度不同。而且在各种遗传因素中，NHC是涉及到免疫应答的质和量的最主要因素。 （2）同一物种不同个体的年龄、性别与健康状况也对免疫应答的质和量有影响。一般地，青壮年动物对免疫应答的质和量高，雌性动物比雄性动物生成的抗体多。 3.抗原进入动物机体的方式 （1）抗原进入动物机体的数量：抗原的剂量要适中，剂量太高或者太低都会诱导免疫耐受。 （2）免疫途径：按免疫应答强度从高到低，皮内免疫>皮下免疫>腹腔注射=静脉注射。 （3）两次免疫之间的时间间隔和次数。 （4）使用免疫佐剂：弗氏试剂诱导IgG类抗体产生；明矾试剂诱导IgE类抗体产生。 这些原理你可以参考，然后调整你的protocols. Good Luck ! |
2楼2013-04-21 14:43:46
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