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麦堂straw

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质糖基化位点鉴定

在毕赤酵母中新表达一个重组蛋白,已确定其发生了糖基化现象,现想对其进行糖基化位点的鉴定,主要想通过胶内酶解——肽段富集——质谱分析——数据库检索等系列流程,问一下小木虫的各位大侠,有没有做过相关的工作,在国内一般哪个公司或研究机构做的比较好收费便宜?
谢谢各位!
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山有木兮木有枝,心悦君兮君不知。
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麦堂straw

银虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-24 19:32:14
呵呵,钱小红和贺福初是一个团队的,据说他们团队的质谱仪器得论排来数,有钱就是好啊。
ps,感谢你的建议,不过蛋白质分子量测定我已经搞定了,在华大完成的,检测结果和理论值竟然一致,我都不敢相信,这是题外 ...

这个真不清楚,我也是刚做糖基化分析,我们实验室做这方面的就我一个,所以现在也是摸石头过河,没什么经验可以借鉴,话说NMR我都是百度一下才知道代表个什么东西,你发个帖子或者到网上再去找找看吧,抱歉帮不了你。你们实验室在哪哦,也都是送样到北京吗,好奇一下你们隔壁实验室的童鞋最后糖基化位点是鉴定到了还是木有结果。。。
山有木兮木有枝,心悦君兮君不知。
16楼2013-04-25 09:46:52
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

更正:“那里设备是MALDI-MS”,我是提笔忘字,
3楼2013-04-20 12:00:59
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麦堂straw

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-04-20 11:47:59
质谱鉴定可以比较容易地检测糖基化。你可以找北京大学中心实验楼质谱室,在北京大学医学部2楼,那里设备是MADI-MS,精度还可以收费可能是北京地区最低的,及对北京大学内部服务也对北京大学之外服务。北京大学生物医 ...

感谢回复!可是要分析糖基化位点,貌似是要做肽段谱图,需十分精确,我查询到的公司一般用的都是nano-LC-MS/MS,为纳升级别的,且还需去糖基化酶进行去糖基化。请问你知道具体情况,能做这个吗?
山有木兮木有枝,心悦君兮君不知。
5楼2013-04-20 12:32:02
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 哇菇凉哈哈。赠人玫瑰手有余香 2013-04-22 18:46:12
MALDI-MS可以完成多肽的糖基化、磷酸化、甲基化、乙酰化等各种共价的修饰。具体样品准备你可以和有关实验室和检测中心协商。肽段谱图一般用胰蛋白酶有限水解蛋白质即可,因为肽分子量过大质谱无法精确检测出分子量,到用软件找匹配时结果不唯一。不过糖基的分支点肯定无法直接由MALDI-MS可以测出,必须在样品准备时使用不同的糖基酶有限水解后用MALDI-MS测定后拼装。
6楼2013-04-20 12:41:06
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