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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质糖基化位点鉴定
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 麦堂straw at 2013-04-20 18:36:04
十分不好意思，刚一直做实验，没有及时回复。谢谢你提供的参考信息，我会认真阅读，我之前一直在做克隆，对蛋白修饰质谱分析方面完全是小白，不懂的地方还请多多指教，谢谢！...

大家共同学习。
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11楼2013-04-20 22:50:46
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
麦堂straw: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-04-22 20:50:27
内容已删除
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12楼2013-04-21 20:01:17
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 麦堂straw at 2013-04-20 18:36:04
十分不好意思，刚一直做实验，没有及时回复。谢谢你提供的参考信息，我会认真阅读，我之前一直在做克隆，对蛋白修饰质谱分析方面完全是小白，不懂的地方还请多多指教，谢谢！...

想鉴定糖修饰类型和糖修饰位点的话，MALDI-TOF是不能完成的，MALDI-TOF只能检测酶解肽段的m/z信息，不能给出更多的数据，必须用LC-MS/MS二级质谱来做。但是这里有个问题，就是糖基化修饰的共价键比较容易打断，国内很多的二级质谱用的是CID或者HCD，高能氦气进行碎化处理，很容易丢失糖基化修饰，所以，牵涉到糖基化修饰定位，但凡能鉴定出来多少就是多少了，不求完全鉴定。北京那边的质谱我做过检测分子量的（maldi-tof），没做出来，不知道是不是我运气不好。国内糖基化修饰钱小红做的比较好（其他人不知道），她鉴定了一系列的肝病相关糖基化修饰。楼主要做的和隔壁实验室一个同学做的非常类似，要鉴定酵母表达蛋白的糖基化修饰，去了一个北京的质谱实验室摸了一下条件，最后不了了之。祝你好运！！！
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13楼2013-04-23 21:28:43
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麦堂straw

银虫 (小有名气)
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13楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-23 21:28:43
想鉴定糖修饰类型和糖修饰位点的话，MALDI-TOF是不能完成的，MALDI-TOF只能检测酶解肽段的m/z信息，不能给出更多的数据，必须用LC-MS/MS二级质谱来做。但是这里有个问题，就是糖基化修饰的共价键比较容易打断，国内 ...

感谢回复~很多人提到钱小红做糖基化修饰很牛，我再去联系联系看
另，蛋白分子量检测质谱（MALDI-TOF-MS）应该挺普通的吧，我们实验室都是送样到北京中科院过程所，效果还可以，300块一个样，你要的话可以给你联系方式或者你也可以自己进他们网站查询。
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山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
14楼2013-04-24 16:46:13
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)
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14楼: Originally posted by 麦堂straw at 2013-04-24 16:46:13
感谢回复~很多人提到钱小红做糖基化修饰很牛，我再去联系联系看
另，蛋白分子量检测质谱（MALDI-TOF-MS）应该挺普通的吧，我们实验室都是送样到北京中科院过程所，效果还可以，300块一个样，你要的话可以 ...

呵呵，钱小红和贺福初是一个团队的，据说他们团队的质谱仪器得论排来数，有钱就是好啊。
ps，感谢你的建议，不过蛋白质分子量测定我已经搞定了，在华大完成的，检测结果和理论值竟然一致，我都不敢相信，这是题外话了，呵呵。
话说想问一下，你知道哪里有利用NMR测定小分子结构的实验室吗，比如寡糖/糖肽，谢谢！
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15楼2013-04-24 19:32:14
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麦堂straw

银虫 (小有名气)
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15楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-24 19:32:14
呵呵，钱小红和贺福初是一个团队的，据说他们团队的质谱仪器得论排来数，有钱就是好啊。
ps，感谢你的建议，不过蛋白质分子量测定我已经搞定了，在华大完成的，检测结果和理论值竟然一致，我都不敢相信，这是题外 ...

这个真不清楚，我也是刚做糖基化分析，我们实验室做这方面的就我一个，所以现在也是摸石头过河，没什么经验可以借鉴,话说NMR我都是百度一下才知道代表个什么东西，你发个帖子或者到网上再去找找看吧，抱歉帮不了你。你们实验室在哪哦，也都是送样到北京吗，好奇一下你们隔壁实验室的童鞋最后糖基化位点是鉴定到了还是木有结果。。。
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山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
16楼2013-04-25 09:46:52
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)
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16楼: Originally posted by 麦堂straw at 2013-04-25 09:46:52
这个真不清楚，我也是刚做糖基化分析，我们实验室做这方面的就我一个，所以现在也是摸石头过河，没什么经验可以借鉴,话说NMR我都是百度一下才知道代表个什么东西，你发个帖子或者到网上再去找找看吧，抱歉帮不了你 ...

我这边是武大生科院的，我们实验室蛋白质谱鉴定都是送到华大北京那边检测的。隔壁实验室的童鞋在北京杨福全老师（记得不是很清楚）那里做了几次预实验，没什么结果，蛋白就用完了。所以，你最好多查相关的文献，做好充分准备。不是说成功总是亲睐有准备的人嘛！
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17楼2013-04-25 12:46:00
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麦堂straw

银虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-25 12:46:00
我这边是武大生科院的，我们实验室蛋白质谱鉴定都是送到华大北京那边检测的。隔壁实验室的童鞋在北京杨福全老师（记得不是很清楚）那里做了几次预实验，没什么结果，蛋白就用完了。所以，你最好多查相关的文献，做 ...

嗯，是这样说的，最近网上不流传一篇文章，叫《水喝多了，尿自然就有了》，大意就是看的多了，做的多了，论文也就有了，好期待那一天
呃，跑题了，谢谢ls的热情相助，同做生物，欢迎交流探讨，可能我问的会比较多，不要嫌弃~
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山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
18楼2013-04-25 18:52:34
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 麦堂straw at 2013-04-25 18:52:34
嗯，是这样说的，最近网上不流传一篇文章，叫《水喝多了，尿自然就有了》，大意就是看的多了，做的多了，论文也就有了，好期待那一天
呃，跑题了，谢谢ls的热情相助，同做生物，欢迎交流探讨，可能我问的会 ...

互相学习进步了，呵呵。这几天被毕业论文搞得焦头烂额！
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19楼2013-04-25 21:10:28
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麦堂straw

银虫 (小有名气)
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19楼: Originally posted by 山水老流氓 at 2013-04-25 21:10:28
互相学习进步了，呵呵。这几天被毕业论文搞得焦头烂额！...

熬一熬就解放了，然后睡3天，O(∩_∩)O哈哈~
每天登一登小木虫，心情更舒畅
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山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
20楼2013-04-27 11:20:04
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