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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质糖基化位点鉴定
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麦堂straw

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质糖基化位点鉴定

在毕赤酵母中新表达一个重组蛋白，已确定其发生了糖基化现象，现想对其进行糖基化位点的鉴定，主要想通过胶内酶解——肽段富集——质谱分析——数据库检索等系列流程，问一下小木虫的各位大侠，有没有做过相关的工作，在国内一般哪个公司或研究机构做的比较好收费便宜？
谢谢各位！
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山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
1楼 2013-04-20 10:16:18
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山水老流氓

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 麦堂straw at 2013-04-20 18:36:04
十分不好意思，刚一直做实验，没有及时回复。谢谢你提供的参考信息，我会认真阅读，我之前一直在做克隆，对蛋白修饰质谱分析方面完全是小白，不懂的地方还请多多指教，谢谢！...

想鉴定糖修饰类型和糖修饰位点的话，MALDI-TOF是不能完成的，MALDI-TOF只能检测酶解肽段的m/z信息，不能给出更多的数据，必须用LC-MS/MS二级质谱来做。但是这里有个问题，就是糖基化修饰的共价键比较容易打断，国内很多的二级质谱用的是CID或者HCD，高能氦气进行碎化处理，很容易丢失糖基化修饰，所以，牵涉到糖基化修饰定位，但凡能鉴定出来多少就是多少了，不求完全鉴定。北京那边的质谱我做过检测分子量的（maldi-tof），没做出来，不知道是不是我运气不好。国内糖基化修饰钱小红做的比较好（其他人不知道），她鉴定了一系列的肝病相关糖基化修饰。楼主要做的和隔壁实验室一个同学做的非常类似，要鉴定酵母表达蛋白的糖基化修饰，去了一个北京的质谱实验室摸了一下条件，最后不了了之。祝你好运！！！
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13楼2013-04-23 21:28:43
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

更正：“那里设备是MALDI-MS”，我是提笔忘字，。
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3楼2013-04-20 12:00:59
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麦堂straw

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-04-20 11:47:59
质谱鉴定可以比较容易地检测糖基化。你可以找北京大学中心实验楼质谱室，在北京大学医学部2楼，那里设备是MADI-MS,精度还可以收费可能是北京地区最低的，及对北京大学内部服务也对北京大学之外服务。北京大学生物医 ...

感谢回复！可是要分析糖基化位点，貌似是要做肽段谱图，需十分精确，我查询到的公司一般用的都是nano-LC-MS/MS，为纳升级别的，且还需去糖基化酶进行去糖基化。请问你知道具体情况，能做这个吗？
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山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
5楼2013-04-20 12:32:02
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 哇菇凉哈哈。赠人玫瑰手有余香 2013-04-22 18:46:12
MALDI-MS可以完成多肽的糖基化、磷酸化、甲基化、乙酰化等各种共价的修饰。具体样品准备你可以和有关实验室和检测中心协商。肽段谱图一般用胰蛋白酶有限水解蛋白质即可，因为肽分子量过大质谱无法精确检测出分子量，到用软件找匹配时结果不唯一。不过糖基的分支点肯定无法直接由MALDI-MS可以测出，必须在样品准备时使用不同的糖基酶有限水解后用MALDI-MS测定后拼装。
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6楼2013-04-20 12:41:06
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