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麦堂straw

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质糖基化位点鉴定

在毕赤酵母中新表达一个重组蛋白，已确定其发生了糖基化现象，现想对其进行糖基化位点的鉴定，主要想通过胶内酶解——肽段富集——质谱分析——数据库检索等系列流程，问一下小木虫的各位大侠，有没有做过相关的工作，在国内一般哪个公司或研究机构做的比较好收费便宜？
谢谢各位！
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山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
1楼 2013-04-20 10:16:18
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 哇菇凉哈哈。赠人玫瑰手有余香 2013-04-22 18:46:12
MALDI-MS可以完成多肽的糖基化、磷酸化、甲基化、乙酰化等各种共价的修饰。具体样品准备你可以和有关实验室和检测中心协商。肽段谱图一般用胰蛋白酶有限水解蛋白质即可，因为肽分子量过大质谱无法精确检测出分子量，到用软件找匹配时结果不唯一。不过糖基的分支点肯定无法直接由MALDI-MS可以测出，必须在样品准备时使用不同的糖基酶有限水解后用MALDI-MS测定后拼装。
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6楼2013-04-20 12:41:06
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

更正：“那里设备是MALDI-MS”，我是提笔忘字，。
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3楼2013-04-20 12:00:59
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麦堂straw

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-04-20 11:47:59
质谱鉴定可以比较容易地检测糖基化。你可以找北京大学中心实验楼质谱室，在北京大学医学部2楼，那里设备是MADI-MS,精度还可以收费可能是北京地区最低的，及对北京大学内部服务也对北京大学之外服务。北京大学生物医 ...

感谢回复！可是要分析糖基化位点，貌似是要做肽段谱图，需十分精确，我查询到的公司一般用的都是nano-LC-MS/MS，为纳升级别的，且还需去糖基化酶进行去糖基化。请问你知道具体情况，能做这个吗？
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山有木兮木有枝，心悦君兮君不知。
5楼2013-04-20 12:32:02
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 麦堂straw at 2013-04-20 12:32:02
感谢回复！可是要分析糖基化位点，貌似是要做肽段谱图，需十分精确，我查询到的公司一般用的都是nano-LC-MS/MS，为纳升级别的，且还需去糖基化酶进行去糖基化。请问你知道具体情况，能做这个吗？...

“要分析糖基化位点，貌似是要做肽段谱图，需十分精确。"不是貌似肽段谱图，而是貌似Ladder Sequencing，即Ediman降解结合质谱测定多肽序列，也就是用质谱代替凝胶电泳测定每一步Ediman降解之后减少一个氨基酸残基分子量的多肽段的相对分子量，但是现在能够用串联质谱直接测定多肽段的氨基酸序列了，不用在结合用Ediman降解。而且许多的多肽的糖基化、磷酸化、甲基化、乙酰化等各种共价的修饰，尤其是磷酸化修饰已经能够直接从质谱读出。但是不幸的是糖分子不是线性分子，而是可能有很多分支。至少在分支位点必须用糖苷酶水解以确定分支的类型，目前的质谱还打不到能够区别糖链不同分支的水平。
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7楼2013-04-20 13:42:35
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