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关于酵母双杂交的一些问题
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| 本人想做酵母双杂家，现有蛋白A，A-AD和A-BD的载体我都有，现在想验证一下蛋白A分别和B， C，D，E之间是否有相互作用。我该用A-AD和其他蛋白连接BD去做，还是应该A-BD 和其他蛋白连接BD去做？有什么不同嘛？请牛人给予详细的解答，谢谢 |
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zhenwuhuang
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3楼2013-04-14 16:01:22
zyx335588
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
wchuangqi: 金币+10 2013-04-15 01:25:45
感谢参与，应助指数 +1
wchuangqi: 金币+10 2013-04-15 01:25:45
| 首先要测试你的A.B.C.D.E是否有自激活活性，如有则只能将其连到AD载体上了，相应的另一个蛋白连到BD上。如果均没有自激活现象，个人觉着两者没有太大区别。如果可能就将两个都做了，毕竟融合后的结构是否发生变化不好说，加上其它因素，所以双杂的结果一般还需要其它实验进一步证实。要想偷点儿懒的话就将诱饵A连到BD上，其它的连到AD上，这样只需测试A的自激活即可，如果比较幸运，其它的自激活测试就不用做了。其实好多配套的AD和BD载体的多克隆位点很相似，因此我做的时候都是同一个蛋白同时连这两个载体，以备不时之需。 |
2楼2013-04-14 15:42:24
4楼2013-04-15 01:26:09
