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守好我的道

新虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-10 07:11:05
echochen1017: 金币+1 2013-04-27 21:28:17
silicare: BioEPI+1 2013-04-28 09:56:58

做个实验对照。个人认为可以这样设计：首先用你所用的pET28B，直接转化，涂板。长斑正常，说明你用的平板，感受态细胞和转化的操作没有问题。其次再验证你的酶切和连接有没有问题。一个一个的验证，实验做不出来，总是有原因的。

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2楼2013-04-10 02:03:11

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新虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★
echochen1017: 金币+1, ★有帮助 2013-04-27 21:25:22
silicare: BioEPI+1, 鼓励新虫发帖交流 2013-04-28 09:57:51

你应该一步一步的做空白实验排查，用别的连接产物接种平板（同抗性）以检测是否是平板问题，空质粒转化涂板以验证感受态是否正常，酶切我还没遇见过棘手的问题，但是连接遇见过，换过好几种方法，T4，快速连接试剂盒，温度的话，16°C过夜，25°C15min什么的都尝试过。不过你说什么都不长，可能还是感受态有问题，转化没成功。

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俄罗斯方块告诉我们：犯下的错误会累积，获得的成功会消失。

7楼2013-04-15 22:40:27

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