[求助] 基因克隆转化表达遇到问题，求大神解答

3楼: Originally posted by carlisle612 at 2013-04-10 11:39:08
会不会是感受态的问题~没有一个菌落出现嘛？建议先换个感受态试一下   28a是卡那抗性噢，上次我粗心大意加了氨苄~注意小细节~楼主加油噢！

6楼: Originally posted by jiachd2010 at 2013-04-11 23:06:25
首先你得方案没有错误，每一步的试剂、材料及加量等都正确，然后没做一步都跑一下电泳，作对照，最后看哪一步有问题就再找原因
酶切质粒的时候有没有把抗性基因给破坏，引物的设计是否准确等都要验证啊

2楼: Originally posted by 守好我的道 at 2013-04-10 02:03:11
做个实验对照。个人认为可以这样设计：首先用你所用的pET28B，直接转化，涂板。长斑正常，说明你用的平板，感受态细胞和转化的操作没有问题。其次再验证你的酶切和连接有没有问题。一个一个的验证，实验做不出来，总 ...

13楼: Originally posted by xutao at 2013-05-05 16:02:27
涂个空白版试试，如果不行说明感受态有问题；
降低平板中抗生素浓度

12楼: Originally posted by 守好我的道 at 2013-04-27 21:39:57
平板是容易染菌的，建议保存时间不要过十天。但是，我们也有用过保存一个月的平板（用保鲜膜包好，4度保存），取决于你倒置平板时的无菌操作。
菌液涂上去，干的速度是比较的快，100ul的菌液，三十分钟应该就会干了 ...