应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR杂带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 650  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jose123

铜虫 (初入文坛)

[求助] PCR杂带

最近抽提了鱼的组织肝脏、脾脏、头肾和血液的RNA，做溶菌酶基因的半定量PCR，设计了好几对引物（all none），奇怪的是：
在肝脏中只有一条目的带，其他组织中均有2条带。不知什么原因，求解释啊，新手金币不足，见谅！！！

222.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-04-04 19:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-05 13:25:52
下面的那条带可能是引物二聚体或者非特异扩增。感觉是你的基因在肝脏里面丰度高，所以P出来很亮的一条带。其他组织里面少，所以产生非特异扩增或者形成大量引物二聚体。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-05 00:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jose123

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-05 00:28:22
下面的那条带可能是引物二聚体或者非特异扩增。感觉是你的基因在肝脏里面丰度高，所以P出来很亮的一条带。其他组织里面少，所以产生非特异扩增或者形成大量引物二聚体。

dimer的可能性感觉很小，因为多出的条带还是比较大的，差不多100bp。应该也可以排除引物的问题。至于非特异性，我也跑了梯度，那条带还是消除不了。（感觉是你的基因在肝脏里面丰度高，所以P出来很亮的一条带。为什么丰度高就不会有非特异性？）
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-05 21:58:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
jose123: 金币+4, ★有帮助 2013-04-05 23:53:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by jose123 at 2013-04-05 21:58:21
dimer的可能性感觉很小，因为多出的条带还是比较大的，差不多100bp。应该也可以排除引物的问题。至于非特异性，我也跑了梯度，那条带还是消除不了。（感觉是你的基因在肝脏里面丰度高，所以P出来很亮的一条带。为什 ...

引物二聚体一般是比你跑出来的稍微小一点，所以我不好区分是否是引物二聚体或者是非特异性。丰度高的活说明模板浓度高，形成引物二聚体或者引物与其他非特异性结合的几率降低。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-05 23:32:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jose123

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-05 23:32:39
引物二聚体一般是比你跑出来的稍微小一点，所以我不好区分是否是引物二聚体或者是非特异性。丰度高的活说明模板浓度高，形成引物二聚体或者引物与其他非特异性结合的几率降低。...

谢谢！
回复此楼
5楼2013-04-05 23:48:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jose123 at 2013-04-05 23:48:54
谢谢！...

忘记说了，你可以试试不加模板，其他PCR组分相同，如果还有下面的带，说明是引物二聚体。如果没有了，可能是引物与模板有非特异结合。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-04-06 00:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jose123

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-06 00:02:09
忘记说了，你可以试试不加模板，其他PCR组分相同，如果还有下面的带，说明是引物二聚体。如果没有了，可能是引物与模板有非特异结合。...

不加模板，pCR除加样外，程序设置页还是一样吗
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-06 08:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jose123 at 2013-04-06 08:37:25
不加模板，pCR除加样外，程序设置页还是一样吗...

是的。就是看看下面的带是不是引物自身聚合形成的。
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-06 11:00:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jose123 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +12 梁富贵险中求 2026-04-04 12/600 2026-04-06 22:54 by chenzhimin
[考研] 调剂求助（生物与医药） +3 @6952 2026-04-06 3/150 2026-04-06 21:48 by Ecowxq666！
[考研] 0703调剂，一志愿天津大学319分 +16 haaaabcd 2026-04-05 17/850 2026-04-06 19:25 by 尚水阁主
[考研] 0703求调剂383分 +9 W55j 2026-04-03 9/450 2026-04-06 06:50 by houyaoxu
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +12 lyz0427 2026-04-03 12/600 2026-04-06 06:37 by houyaoxu
[考研] 080200学硕，277分，数一104，求带走！ +7 瓶子PZ 2026-03-31 7/350 2026-04-05 17:49 by liucky
[考研] 电子信息调剂交叉学科有推荐吗 +6 jhtfeybgj 2026-04-01 9/450 2026-04-05 11:13 by 猪会飞
[考研] 271分求调剂学校 +12 zph158488！ 2026-04-02 13/650 2026-04-05 10:13 by lqwchd
[考研] 一志愿华中农业大学0710（A）初试329分 求调剂 +4 一名26考研生 2026-04-04 4/200 2026-04-05 10:01 by barlinike
[考研] 278求调剂 +3 依旧！ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 20:27 by 蓝云思雨
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 366求调剂一志愿东北大学 +8 运气来得若有似� 2026-04-02 8/400 2026-04-02 21:39 by dongzh2009
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 272求调剂，接受跨专业调剂！ +4 闲鱼卢 2026-03-31 4/200 2026-04-02 11:18 by guyan1000
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 09:52 by yulian1987
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 13/650 2026-04-02 09:17 by olim
[考研] 化学工程专硕324分，一志愿中国矿业大学求调剂 +7 耿耿1314 2026-04-01 7/350 2026-04-02 07:40 by 尚水阁主
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-31 11/550 2026-04-01 09:43 by xiayizhi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭