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引物酶切位点问题
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引物酶切位点问题
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大家好,我要做克隆表达,但是设计的引物没有加酶切位点,做TA克隆的话会不会比较麻烦?有没有比较好的方法改进啊?一般克隆载体大家用什么载体啊?还有表达载体大家又用什么呢?
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思路决定出路。。。
1楼
2013-04-01 14:11:45
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Leo_xin
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13楼
:
Originally posted by
紫藤玲珑
at 2013-04-08 19:19:57
我设计了两对引物,本来分数都挺高的
可是,引入酶切位点后都形成了发卡结构。酶切位点的选择很有限啊
可以在引物上不设计酶切位点,先连接到T载体上,再选择T载体上的酶切位点进行酶切吗?(如果此酶切位点表达 ...
可以的,现在的T载体上都有MCS.
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还有太多地方值得改进。
16楼
2013-04-09 13:50:58
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myprayer: MolEPI+1, 鼓励应助,分子生物版块,期待你的精彩。
2013-04-01 22:33:45
myprayer:
2013-04-01 22:34:37
连接到一般的TA载体就行。你看看后来要用什么酶切位点,找一个带有所需酶切位点的TA载体。
你可用全式金的TA载体。pEASY-T1或pEASY-T3都行,上边有很多酶切位点,看看适合不适合下游操作。
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2楼
2013-04-01 15:13:14
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dulei
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表达载体的话,在大肠杆菌里表达用pET系列的载体。宿主菌用BL21(DE3)。
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3楼
2013-04-01 15:14:44
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加上酶切位点就OK了
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4楼
2013-04-01 22:02:29
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