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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 急！！！黄酮苷过LH-20凝胶柱的相关问题！
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宝贝猪301

木虫 (正式写手)

[求助] 急！！！黄酮苷过LH-20凝胶柱的相关问题！

小弟需要分离纯化几种黄酮苷，这几种黄酮苷挂有一个或两个糖。

现有几点疑问：

1、纯甲醇和50%甲醇谁的洗脱能力强？

2、选用什么洗脱剂最合适？

3、之前用过50%甲醇洗脱，整个柱子都变黄了，仅仅洗脱下来部分物质。今天尝试了纯甲醇洗脱，柱头3cm为白色，其余部分也是全部变黄，同样仅仅洗脱下来部分物质。两次均是大部分物质挂在柱子上洗不下来！有什么好的办法么？！

4、有没有其它可以分离这种大极性黄酮苷的办法？！（PS：条件有限，没办法用制备）

望各位大神给予指导！

[ 来自科研家族 Natural Products家族 ]
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我...明明努力了！
1楼 2013-03-31 17:22:46
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宝贝猪301

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 787491498 at 2013-04-20 16:11:16
请问您的径高比是多少？上样量又是多少？有没有标准？...

我要分的几种物质的分子量相差不是特别大，所以现在放弃了凝胶，尝试聚酰胺！

之前我请教过研博做天然产物的老师，他说他读博时分过黄酮苷。正丁醇相先过硅胶柱（柱子要粗，径高比为1:3~1:5，加压）斩断，再用聚酰胺去细分（聚酰胺是根据羟基吸附分离，效果好的话可以拿到比较纯的单体），最后用凝胶亦或是反相去纯化！

我不知道你分的是黄酮还是黄酮苷，如果你要分的东西水溶性不好，那么切记把柱子装的太高，不然很容易结晶析出，洗都洗不下来。所以条件允许的话，最好加压。

提醒一下，凝胶（分子筛）不能加压的，不然会破坏结构，凝胶就废了。
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我...明明努力了！
18楼2013-04-20 19:35:48
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查看全部 26 个回答

yunnanyan

至尊木虫 (文坛精英)
没做过，友情帮顶贴
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2楼2013-03-31 20:32:16
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wm0629

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢 2013-04-01 09:50:25
宝贝猪301: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-04-01 10:34:57
实验室一般都用纯甲醇作为流动相，上完样后在柱子上饱和4-6小时，然后用纯甲醇洗脱，把流速开到最大，柱子上的东西最好一天走完，这样柱子就不会有吸附。一般走完柱子后柱头会有变色的现象，不过没关系，你可以把那部分扣出去，继续上样。以上建议，仅供参考。
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艰难困苦，玉汝于成。
3楼2013-04-01 07:56:45
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宝贝猪301

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wm0629 at 2013-04-01 07:56:45
实验室一般都用纯甲醇作为流动相，上完样后在柱子上饱和4-6小时，然后用纯甲醇洗脱，把流速开到最大，柱子上的东西最好一天走完，这样柱子就不会有吸附。一般走完柱子后柱头会有变色的现象，不过没关系，你可以把那 ...

请问你们上的柱子是凝胶柱，还是普通的硅胶柱？

我上样后仅饱和了十几分钟，会不会有影响？

流速会对分离效果有影响吗？是不是说柱子越高、流速越慢，分离效果就越好？

纯甲醇洗脱后，柱子变黄；1%NaOH冲柱可以洗去吸附残留的物质。是否就说明相对LH-20柱来说，水的洗脱能力比纯甲醇强
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我...明明努力了！
4楼2013-04-01 10:34:31
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