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晴空Alex

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求基因敲除的常用方法

我想做一个关于蓝藻(原核生物)方面的基因敲除,想参照E.coli的基因敲除方法,求高手指点迷津,另外用什么试剂盒比较好?
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多读文献少睡觉
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励应助! 2013-03-28 02:26:34
构建载体的方法是差不多的,把抗性基因插在两个同源臂之间,通过双交换同源重组取代目的基因。转化的方法有点不同。很多单细胞蓝藻具备天然感受态,可以用自然转化的方法。有些不能自然转化的,需要用结合或者电转化。这些方法文献里或者网上都可以搜到的。转化子筛选时需要一两个月。因为在通常的实验室培养条件下,每个蓝藻细胞里有十几个拷贝的基因组DNA,需要划线等segregation。
2楼2013-03-28 01:51:57
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