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晴空Alex

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 求基因敲除的常用方法

我想做一个关于蓝藻（原核生物）方面的基因敲除，想参照E.coli的基因敲除方法，求高手指点迷津，另外用什么试剂盒比较好？

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多读文献少睡觉

1楼 2013-03-27 23:39:03

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-28 02:26:34

构建载体的方法是差不多的，把抗性基因插在两个同源臂之间，通过双交换同源重组取代目的基因。转化的方法有点不同。很多单细胞蓝藻具备天然感受态，可以用自然转化的方法。有些不能自然转化的，需要用结合或者电转化。这些方法文献里或者网上都可以搜到的。转化子筛选时需要一两个月。因为在通常的实验室培养条件下，每个蓝藻细胞里有十几个拷贝的基因组DNA，需要划线等segregation。

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2楼2013-03-28 01:51:57

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