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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

[求助] 各位牛人 分离纯化多肽过离子交换层析 吸光度是负值是什么情况

我用NaCl线性洗脱,之后测吸光度,之前校过零了,怎么有的值会是负的?而且吸光度都很小,看文献有的吸光度都大于1了,我的最高的才0.1,请各位高手解惑啊啊啊
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

快来个人帮帮我吧
小妹做个实验不容易啊啊啊
2楼2013-03-28 10:09:39
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

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3楼: Originally posted by lincyb at 2013-03-29 11:15:38
妹子实在不易,还自己顶自己的贴...

敢不敢回复个有技术含量的!!
4楼2013-03-29 12:33:03
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

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5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-03-29 15:14:34
你用什么仪器做的,有没有作图表?

UV-1100型 紫外可见光分光光度计
没有做表的
9楼2013-04-01 13:44:59
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

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6楼: Originally posted by tjuakasa at 2013-03-29 15:42:21
太不详细了啊
先问你问题:
在线检测的?还是接取部分用紫外检测器检测?
一般以在线检测吧,wash之后到基线,再线性elution应该出峰,
这个峰如果很小,那就是吸附量很低;去找你的柱子和吸附条件的问题,别的 ...

是接取部分用紫外检测器检测的,多肽是在220nm测的,我是新手,第一次过柱子,看到文献里用SP Sephadex C-25这种填料纯化多肽,所以买来试试,神马都不懂
10楼2013-04-01 13:47:41
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

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7楼: Originally posted by Alexalex19 at 2013-03-29 21:47:49
校零出现问题了吧

木有哇,我都校过零了,还是会出现负值
11楼2013-04-01 13:48:01
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

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12楼: Originally posted by tjuakasa at 2013-04-01 14:56:33
可怜的娃啊,虽然不知道你具体怎么测量的。
我没检测过多肽,可是经常做蛋白质。
不能这么测量吧??!!220nm检测不靠谱的。
几乎所有小分子在215-230nm都有明显吸收。
尤其是盐类在230左右对生物大分子的吸收 ...

不会吧我全是220nm检测的,看文献都是这个波长检测多肽啊,你是多少波长检测的?
13楼2013-04-01 17:12:14
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dandan_cece

铜虫 (正式写手)

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14楼: Originally posted by tjuakasa at 2013-04-01 17:40:20
哦,我没说明白,在220nm可以测,但是要测纯溶液吧,我觉得不能含盐。
文献这么测,应该是无缓冲液,或者脱过盐的吧?
我没看过这类的文献,说的只是个人经验。
不要怕,多问问别人

脱盐不会还要过柱子才能脱吧?
15楼2013-04-01 17:58:02
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