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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB做不出来
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浪漫的马

新虫 (初入文坛)

[求助] WB做不出来

小虫做WB已经快半年了，但是一直没做出来，蛋白是从MCF-7和HepG-2提取的，我接的一抗是胰岛素受体，出来的条带始终是模模糊糊的，请高手指点。
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1楼 2013-03-25 15:35:52
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浪漫的马

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by dengqiong301 at 2013-03-28 01:40:00
首先还是从技术上去找问题，可以直接把提取的蛋白跑个胶，用考马斯亮蓝染下看看条带如何。
也有可能目的蛋白比较容易降解，所以最好加一定量的蛋白酶抑制剂。
acting其实是actin，一种常见内参，内参表达量而且稳 ...

蛋白酶抑制剂是什么？难道是没加，造成目的蛋白降解？我们用的细胞裂解液一般为蛋白裂解液+pmsf(100:1），蛋白酶抑制剂我们之前还没加过。请问你们的蛋白酶抑制剂是什么？是有专门买的还是自己配置？另一个想请教相关文献怎么查询？求指导？谢谢！
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14楼2013-03-29 19:26:39
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
浪漫的马: 金币+2, ★有帮助 2013-03-25 18:13:28
有没有染其他的，像内参抗体，确定是不是技术问题。不是，那就是这个一抗有问题了，换一个试试了
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2楼2013-03-25 16:51:29
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浪漫的马

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-25 16:51:29
有没有染其他的，像内参抗体，确定是不是技术问题。不是，那就是这个一抗有问题了，换一个试试了

可是有条带，就是不清楚，难道大分子的就不太还接？我接下来再染个内参试试。
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3楼2013-03-25 18:05:39
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浪漫的马

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 浪漫的马 at 2013-03-25 18:05:39
可是有条带，就是不清楚，难道大分子的就不太还接？我接下来再染个内参试试。...

今天接了个内参抗体，有条带，非常的明显，能确定是一抗的问题吗，各位虫友，你们接大分子的一抗好接吗，都用的那个公司的一抗呀？
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4楼2013-03-26 17:02:51
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