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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 荧光检测值不稳定
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lingling6919

铁虫 (初入文坛)

[求助] 荧光检测值不稳定

我最近在做一个酶活性抑制剂的筛选实验，用多功能酶标仪做检测。实验的原理就是在底物的两端加了一个荧光基团和一个猝灭基团，酶有活性的话就能把猝灭基团切走，使得底物发出荧光，加入酶抑制剂后荧光值降低或没有。但是我在做实验时经常出现未加抑制剂的对照孔的荧光值在反应一段时间后反而比刚开始反应是的荧光值低，请问谁有这方面的经验？请教一下。
   我用的检测板是96孔的黑板，高吸附力的，板会反复使用。谢谢各位了。马上要中期考核了，急！
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1楼 2013-03-25 10:16:50
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-26 06:57:04
严格避光，根据反应机理考虑是否需要恒温，加大实验重复次数，试试用新版看是否与板重复使用有关
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2013-03-26 04:20:48
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lingling6919

铁虫 (初入文坛)
怎么都木有人帮忙回答啊，知道的人帮忙看看啊，多谢了！
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2楼2013-03-25 17:29:45
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lingling6919

铁虫 (初入文坛)
反应是在37℃的恒温下进行的，只是检测时是在室温下，但检测时间很短。应该影响不大吧？
用新板做了几次，有两次对照孔是正值，但是后边一次检测又出现了负值，我也就不清楚了。
避光不是严格的黑暗条件，下次我试试。多谢回答了。
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4楼2013-03-26 15:47:21
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