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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Taq可以扩增出来的片段，NEB的phusion却不行
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france5885

新虫 (初入文坛)

[求助] Taq可以扩增出来的片段，NEB的phusion却不行

在13k的质粒上扩增大约3K的片段，Taq是没有问题的，换成phusion就没有了目标条带，求助大家能给点建议。
98    30s
98    10s
66    20s
72    90s    35cycle
退火温度是根据NEB网站上计算的。引物后边有带一个酶切位点。
这个片段应该不是GC rich的。

谢谢！！
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1楼 2013-03-24 17:32:00
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
dmso mg2+ GCbuffer都试试呗

我是扩不出来就换酶。。  NEB新的Q5经常能扩出phusion扩不出来的。。
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2楼2013-03-24 22:14:56
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
不过我遇到的phusion扩不出来的，大多是primer binding的位置和一个terminator很接近，可能会有点影响？   没专门研究过。
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3楼2013-03-24 22:17:20
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