应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！实时定量PCR所有CT值都是undetermined，熔解曲线可以做出来
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 6320  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

monazhou001

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！实时定量PCR所有CT值都是undetermined，熔解曲线可以做出来

是不是cDNA浓度太高了呢？之前普通PCR其实用的浓度更高，大概一千多ng,20体系加了2微升可以出目标条带
做qPCR这回稀释了六倍，200ng每微升，20体系加了1微升
做出来所有CT都是无法识别的，溶解曲线应该没有什么问题看起来。。
可是也做了一下梯度五倍五倍的梯度，做了五个，没有一个出CT值的
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-03-21 17:25:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by monazhou001 at 2013-03-22 13:22:57
我当时是用的是promega的反转录试剂盒，用2μg总RNA做的20体系反转录，最后CDNA是稀释了六倍，加了1μl
我看promega里面写的是反转录要用5μgRNA，那会不会是当时RNA太少了呢？...

2μg RNA不算是少，一般用1μg也是可以的。我觉得有可能是做real-time的试剂问题。你同时做内参基因了吗？
赞一下 回复此楼
17楼2013-03-23 00:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

monazhou001

新虫 (初入文坛)
又拿这次荧光定量的跑了一次电泳，没问题，可以出来目的条带
为什么CT出不来呢？？
求助大家。。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-21 19:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有CT值一般是产物荧光浓度在开始已经达到阈值或者跑完PCR后荧光未达到阈值。具体你是什么问题请自己分析一下。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-22 01:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

monazhou001

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 01:58:54
没有CT值一般是产物荧光浓度在开始已经达到阈值或者跑完PCR后荧光未达到阈值。具体你是什么问题请自己分析一下。

谢谢，那做SYBR这种一般模板起始浓度应该是多少呢？
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-22 08:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕333求调剂 +14 北道巷 2026-03-24 14/700 2026-03-30 18:59 by 源_2020
[考研] 求调剂 +10 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 10/500 2026-03-30 18:34 by 544594351
[考研] 08工科，295，接受跨专业调剂 +3 lmnlzy 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:49 by wangjy2002
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +16 李李不服输 2026-03-26 16/800 2026-03-30 17:47 by wangjy2002
[考研] 291求调剂 +8 Y-cap 2026-03-29 9/450 2026-03-30 16:10 by Wang200018
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-27 8/400 2026-03-30 14:09 by JourneyLucky
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +11 辰沐5211314 2026-03-26 11/550 2026-03-30 09:00 by 无际的草原
[考研] 材料科学与工程求调剂 +6 深V宿舍吧 2026-03-29 6/300 2026-03-29 20:51 by 唐沐儿
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 一志愿厦门大学化学学硕307求调剂 +10 y7czhao 2026-03-26 10/500 2026-03-28 14:23 by 唐沐儿
[考研] 0703化学求调剂，各位老师看看我！！！ +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭