10楼: Originally posted by monazhou001 at 2013-03-22 11:34:07
你当时有测cDNA浓度么？20体系加了多少呢？
我的师兄曾经用相同的引物可以测出来，但是他现在不在实验室了，他说是可能cDNA浓度太高造成的，不过他不记得他当时的体系了...

4楼: Originally posted by monazhou001 at 2013-03-22 08:37:56
谢谢，那做SYBR这种一般模板起始浓度应该是多少呢？...

12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 12:28:03
我没有测过cDNA的浓度，因为要消化掉RNA和除去dNTP才能测。一般我是用1μg总RNA做20μl体系反转录。反转录后的cDNA稀释5-10倍，用1μl做模板。...

11楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-03-22 12:13:28
我们没有测cDNA浓度呢。。。一般就按照20ul体系：6ul水、10ulmix、上下游引物各1ul、模板2ul。可是我同时检测6个基因，相同的模板，就是其中一个检测不出来，其他的都很好。我觉得应该不是ｃＤＮＡ浓度太高的问题。 ...

11楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-03-22 12:13:28
我们没有测cDNA浓度呢。。。一般就按照20ul体系：6ul水、10ulmix、上下游引物各1ul、模板2ul。可是我同时检测6个基因，相同的模板，就是其中一个检测不出来，其他的都很好。我觉得应该不是ｃＤＮＡ浓度太高的问题。 ...

12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 12:28:03
我没有测过cDNA的浓度，因为要消化掉RNA和除去dNTP才能测。一般我是用1μg总RNA做20μl体系反转录。反转录后的cDNA稀释5-10倍，用1μl做模板。...

13楼: Originally posted by monazhou001 at 2013-03-22 13:22:57
我当时是用的是promega的反转录试剂盒，用2μg总RNA做的20体系反转录，最后CDNA是稀释了六倍，加了1μl
我看promega里面写的是反转录要用5μgRNA，那会不会是当时RNA太少了呢？...

15楼: Originally posted by monazhou001 at 2013-03-22 18:08:40
我又重新试了一下，可能是当时的试剂的问题，荧光降解了，这次什么都出来了。。谢谢了，以后再有别的问题再探讨，非常感谢...