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monazhou001

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!实时定量PCR所有CT值都是undetermined,熔解曲线可以做出来

是不是cDNA浓度太高了呢?之前普通PCR其实用的浓度更高,大概一千多ng,20体系加了2微升可以出目标条带
做qPCR这回稀释了六倍,200ng每微升,20体系加了1微升
做出来所有CT都是无法识别的,溶解曲线应该没有什么问题看起来。。
可是也做了一下梯度五倍五倍的梯度,做了五个,没有一个出CT值的
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有CT值一般是产物荧光浓度在开始已经达到阈值或者跑完PCR后荧光未达到阈值。具体你是什么问题请自己分析一下。
3楼2013-03-22 01:58:54
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monazhou001

新虫 (初入文坛)

又拿这次荧光定量的跑了一次电泳,没问题,可以出来目的条带
为什么CT出不来呢??
求助大家。。
2楼2013-03-21 19:54:37
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monazhou001

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-22 01:58:54
没有CT值一般是产物荧光浓度在开始已经达到阈值或者跑完PCR后荧光未达到阈值。具体你是什么问题请自己分析一下。

谢谢,那做SYBR这种一般模板起始浓度应该是多少呢?
4楼2013-03-22 08:37:56
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

楼主。。。我最近也遇见同样的问题,你的问题解决了么?我普通PCR也能P出来的。。从来没遇见过这样的问题。。。有人说是仪器的那几个孔出现问题了。。我正在郁闷中。有人说叫我重新设计引物。。你的解决了么?
keepon
5楼2013-03-22 08:44:16
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