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today521328

新虫 (初入文坛)


[交流] DNA污染

大家好
      我PCR过程中,不加DNA模版竟然扩增出来了条带来了,我做的是16s的扩增。
      我做环境样品的多样性,结果酶切条带很单一,测序结果全部是大肠杆菌,所以怀疑是不是大肠杆菌污染了。如果是污染了想请教各位怎么解决啊!
      跪求大家的帮助啊!做实验总是失败,总是出现这个问题,找不到解决的额办法啊!请各位帮助,谢谢!
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lidonghong

金虫 (正式写手)



today521328(金币+1): 谢谢参与
个人觉得是环境样品取样的问题,可能那个时候就有问题
2楼2013-03-20 17:24:50
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普通回帖

duane

至尊木虫 (正式写手)



today521328(金币+1): 谢谢参与
还是在采样的时候多加小心
3楼2013-03-20 18:01:08
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匿名

用户注销 (正式写手)



today521328(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
10楼2013-03-20 19:41:53
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nobel0510

新虫 (小有名气)



today521328(金币+1): 谢谢参与
帮顶~
12楼2013-03-20 20:01:57
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scjliu

铁杆木虫 (正式写手)



today521328(金币+1): 谢谢参与
不加DNA模版都扩出了条带,那就是污染了。
首先排除试剂是否被污染,其实是PCR管、枪头等被污染,另外加样的时候避免形成气溶胶,最好有独立的操作空间,或者在超净工作台内加样。
14楼2013-03-20 22:34:36
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々暧-〃

版主 (文学泰斗)



today521328(金币+1): 谢谢参与
祝福祝福~~~~
15楼2013-03-20 23:11:23
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111111aa

新虫 (初入文坛)



today521328(金币+1): 谢谢参与
污染!1 扩增产物污染  2 体系中有细菌的核酸! 换个实验室如果还有那就是体系的问题了
18楼2013-03-21 08:35:25
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gaoyang636

木虫 (著名写手)



today521328(金币+1): 谢谢参与
没加模板就出条带,那就得找你PCR体系试剂的问题了。干脆一整套都换新的:水,dNTP, Taq酶,MaCl2什么滴。还是出条带就是引物被污染了……
19楼2013-03-21 08:50:56
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yz2007433052

木虫 (职业作家)



today521328(金币+1): 谢谢参与
一楼说的很对奥
20楼2013-03-21 10:39:27
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cucu奶茶

银虫 (小有名气)



today521328(金币+1): 谢谢参与
是不是taq酶有问题,因为taq酶中会有细菌基因组的污染。lz可以找公司订个超纯的用于16s扩增的酶。
21楼2013-03-21 12:27:18
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jk_xdx

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
想解决么?照我说的做:
1,所有东西都换,
2,枪头换成带塞的,
3,换人换区操作,
4,手套改换就换,tube盖别开得太潇洒,最好轻轻打开,别飞溅液体出来或者喷出气溶胶。
22楼2013-03-21 16:31:51
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win2525

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用LemnisCare的PCR Cleaner 气溶胶污染清除剂,效果很好,
23楼2018-09-29 20:20:25
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LemnisCare

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

24楼2018-11-20 16:58:55
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readytogo4楼
2013-03-20 18:14   回复  
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ywqxxy5楼
2013-03-20 18:25   回复  
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jeangong6楼
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syhorchid7楼
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neu23411楼
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qiuqiu201216楼
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haixiawu17楼
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