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today521328

新虫 (初入文坛)

[交流] DNA污染

大家好
      我PCR过程中，不加DNA模版竟然扩增出来了条带来了，我做的是16s的扩增。
      我做环境样品的多样性，结果酶切条带很单一，测序结果全部是大肠杆菌，所以怀疑是不是大肠杆菌污染了。如果是污染了想请教各位怎么解决啊！
      跪求大家的帮助啊！做实验总是失败，总是出现这个问题，找不到解决的额办法啊！请各位帮助，谢谢！
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1楼 2013-03-20 15:48:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lidonghong

金虫 (正式写手)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
个人觉得是环境样品取样的问题，可能那个时候就有问题
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2楼2013-03-20 17:24:50
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普通回帖

duane

至尊木虫 (正式写手)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
还是在采样的时候多加小心
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3楼2013-03-20 18:01:08
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
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10楼2013-03-20 19:41:53
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nobel0510

新虫 (小有名气)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
帮顶~
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12楼2013-03-20 20:01:57
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scjliu

铁杆木虫 (正式写手)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
不加DNA模版都扩出了条带，那就是污染了。
首先排除试剂是否被污染，其实是PCR管、枪头等被污染，另外加样的时候避免形成气溶胶，最好有独立的操作空间，或者在超净工作台内加样。
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14楼2013-03-20 22:34:36
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々暧-〃

版主 (文学泰斗)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
祝福祝福~~~~
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15楼2013-03-20 23:11:23
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111111aa

新虫 (初入文坛)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
污染！1 扩增产物污染  2 体系中有细菌的核酸！ 换个实验室如果还有那就是体系的问题了
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18楼2013-03-21 08:35:25
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
没加模板就出条带，那就得找你PCR体系试剂的问题了。干脆一整套都换新的：水，dNTP, Taq酶，MaCl2什么滴。还是出条带就是引物被污染了……
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19楼2013-03-21 08:50:56
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yz2007433052

木虫 (职业作家)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
一楼说的很对奥
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20楼2013-03-21 10:39:27
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cucu奶茶

银虫 (小有名气)
★
today521328(金币+1): 谢谢参与
是不是taq酶有问题，因为taq酶中会有细菌基因组的污染。lz可以找公司订个超纯的用于16s扩增的酶。
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21楼2013-03-21 12:27:18
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jk_xdx

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
想解决么？照我说的做：
1，所有东西都换，
2，枪头换成带塞的，
3，换人换区操作，
4，手套改换就换，tube盖别开得太潇洒，最好轻轻打开，别飞溅液体出来或者喷出气溶胶。
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22楼2013-03-21 16:31:51
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win2525

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用LemnisCare的PCR Cleaner 气溶胶污染清除剂，效果很好，
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23楼2018-09-29 20:20:25
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LemnisCare

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
24楼2018-11-20 16:58:55
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readytogo4楼
2013-03-20 18:14   回复  
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ywqxxy5楼
2013-03-20 18:25   回复  
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jeangong6楼
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