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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 摇菌 不浑浊
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fayzhao

金虫 (小有名气)

[求助] 摇菌 不浑浊 已有1人参与

各位好，
目前我正在做的是构建表达载体，我做的是线虫RNAi。

具体步骤是这样的：
双酶切得到正确的目的基因片段，连接到L4440载体，转化到大肠杆菌HT115中，挑单克隆测序，将阳性克隆菌液保存。

遇到的问题是这样的：
首先说明一下LB培养基没有问题（因为同时摇的还有其他菌，且浑浊）。
测序正确的菌液无法摇浑浊。接着我将菌液涂平板以复壮，但是挑到的单菌落还是无法摇浑浊。接下来我将最初转化时涂的平板拿出来（已在4℃保存一周），挑取上面的单菌落摇菌，仍然不能摇浑。

我实在是找不到原因了，无奈啊，希望知道方法的同道帮帮忙啊，O(∩_∩)O谢谢啦
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1楼 2013-03-19 14:25:30
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雅典娜1008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fayzhao: 金币+2 2013-03-20 12:57:58
平板上用的抗生素跟液体培养基的完全一样吗？如果液体培养基没有问题，培养条件也没问题的话那应该不会出现这种情况，我做了N多个了，从来没遇到过！我觉得很有可能是你觉得不可能出错的地方出错了，楼主还是再仔细回想一下吧，不行把培养基、抗生素之类的全重配

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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平静、淡然、感恩
8楼2013-03-19 23:52:17
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无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fayzhao: 金币+1 2013-03-19 18:12:24
考虑过抗性的问题没？会不会是抗生素搞错了。挑单菌落时尽量养肥一点，只要没有卫星菌落就行，要确保挑到了菌！
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2楼2013-03-19 16:45:12
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lijuan211715

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fayzhao: 金币+1 2013-03-19 18:13:08
是不是你要表达的对宿主菌有毒性啊
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-19 17:23:17
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fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无为书生 at 2013-03-19 16:45:12
考虑过抗性的问题没？会不会是抗生素搞错了。挑单菌落时尽量养肥一点，只要没有卫星菌落就行，要确保挑到了菌！

抗生素没有错，一直都是那样用的，换了两次培养基了，都是摇不浑浊……
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4楼2013-03-19 18:13:03
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