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[求助]
ChIP实验 已有2人参与
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本人刚开始做ChIP实验，实验中阴性对照组、不加抗体组和实验组一样都出现了阳性条带，而且Input cotrol样品的条带相对暗很多，现在不知道从哪里分析了，是哪里出了问题？还请各位高手指点 [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:34 ] |
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十分感谢您的指点 
5楼2013-03-19 12:27:44
2楼2013-03-18 21:49:09
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阴性抗体是用的别的无关抗体，因为阴性抗体组也出现了阳性条带，我不知道是什么原因，就不加抗体也做了一遍，结果也出现了阳性条带，IP我用的是santa Cruz的Protein A/G PLUSAgarose。我是先用1%的甲醛进行交联，然后加甘氨酸终止，加裂解液然后超声，超声后的样品取上清，取一定蛋白浓度的样品加Protein A/G PLUSAgarose进行Preclear除去非特异性的蛋白，离心取上清加抗体过夜，再加Protein A/G PLUSAgarose进行沉淀，对沉淀复合物洗涤后，加洗脱缓冲液洗脱并解交联，离心取得上清是我的样品，然后用酚/氯仿抽提，乙醇沉淀。还请您多多指点，在下先谢过了，不胜感激！ |
3楼2013-03-19 08:53:47
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
liuxiuaza: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-03-19 12:25:22
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-21 11:18:31
liuxiuaza: 金币+1 2013-03-22 08:45:44
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4楼2013-03-19 11:43:13