应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重组菌再次活化不表达的原因都有什么
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1132  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组菌再次活化不表达的原因都有什么

我的重组菌三个月前还能诱导出来，而且诱导的挺好，18℃，28℃，37℃三个温度，五个IPTG浓度都表达，且表达量都很多（都是在包涵体中表达）。现在把三个月前保存菌种拿出来活化再诱导，一点儿蛋白都不表达了。然后我用当时构建好保存的质粒重新转化了表达菌株，诱导还是不表达。我想不出来是哪里出了问题，求各位大神指点一二。跪谢...TAT
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-13 19:55:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-13 20:22:38
你用的是什么载体和什么宿主菌？我用pET系列和BL21的话，如果表达很多的话，通常都有泄漏表达，没加IPTG就表达了。你也没看到这种状况？

载体是PET-28a，宿主菌是DE3（貌似就是BL21吧），我第一次表达的时候忘了加对照了，不知道有没有泄露表达，反正现在加不加的跑胶出来都一样了....
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-13 20:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励应助 2013-03-13 20:25:00
匪夷所思~~碰到过以下情况，可能影响：
1.IPTG配错了。有个MM，配高了十倍，结果就悲剧了。所以，检查你所有的试剂、培养基等，确保没有错误的地方。
2.质粒被重组了。要不要再跑一下你的质粒看看完整性，以及插入片段大小是否正确？
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-13 20:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-13 20:13:50
匪夷所思~~碰到过以下情况，可能影响：
1.IPTG配错了。有个MM，配高了十倍，结果就悲剧了。所以，检查你所有的试剂、培养基等，确保没有错误的地方。
2.质粒被重组了。要不要再跑一下你的质粒看看完整性，以及插入 ...

1. IPTG是以前用过的，没有重新配。
2. 质粒用之前做了PCR，片段大小没有问题，现在送去测序了，等结果，我个人认为应该不会有什么问题。

我打算明天借别人一管IPTG再试试，难不成我的IPTG在某种我不知的情况下失去作用了？要不我实在想不出还能有什么问题了....
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-13 20:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你用的是什么载体和什么宿主菌？我用pET系列和BL21的话，如果表达很多的话，通常都有泄漏表达，没加IPTG就表达了。你也没看到这种状况？
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-13 20:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +3 披星河 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:38 by 果果妈咪
[考研] 085602化工求调剂（331分） +8 111@127 2026-03-30 8/400 2026-03-30 21:23 by 研究僧导导
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +11 Youth_ 2026-03-30 11/550 2026-03-30 21:01 by peike
[考研] 286分调剂 +10 Faune 2026-03-30 11/550 2026-03-30 20:35 by 啊李999
[考研] 一志愿华中师范化学332分求调剂 +3 Lyy930824@ 2026-03-29 3/150 2026-03-30 20:15 by DHUSHUAI
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +7 JKSOIID 2026-03-26 7/350 2026-03-30 20:10 by 滴滴上岸呀
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +18 Mr. Z 2026-03-25 19/950 2026-03-30 19:01 by Wang200018
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +16 李李不服输 2026-03-26 16/800 2026-03-30 17:47 by wangjy2002
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +13 丹青奶盖 2026-03-26 15/750 2026-03-30 12:35 by fangnagu
[考研] 070300一志愿211，312分求调剂院校 +4 小黄鸭宝 2026-03-30 4/200 2026-03-30 11:49 by 棒棒球手
[考研] 318求调剂 +7 陈晨79 2026-03-30 7/350 2026-03-30 10:49 by 探123
[考研] 318一志愿吉林大学生物与医药 求调剂 +5 笃行致远. 2026-03-28 5/250 2026-03-30 06:56 by ilovexiaobin
[考研] 本科新能源科学与工程，一志愿华理能动285求调剂 +7 AZMK 2026-03-28 11/550 2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +4 手机用户 2026-03-26 4/200 2026-03-28 07:17 by mmm just
[考研] 一志愿吉大071010，316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭