应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-30a(+)不表达
172/2返回列表上一页12
查看: 3223  |  回复: 16
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jackhua17

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
11楼2013-03-15 02:08:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhanggu

银虫 (小有名气)
我用的也是pet-30a，插入2.3kb的基因，也没表达。
赞一下 回复此楼
12楼2013-03-15 15:34:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qeotnd

新虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
13楼2013-03-15 17:24:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jackhua17 at 2013-03-15 02:08:58
PET-30 是有 N-terminal histag 吧。你加IPTG后induce 温度是多少？我一般20oC 12小时。再就是确信你的protein没有表达还是沉淀了。再就是来源比较远的基因不表达太正常不过了，查查其它类似基因表达的文献。

我都是在37度下培养6-8小时的
赞一下 回复此楼
14楼2013-03-16 11:09:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jathan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你可以降低一下温度，一般降低温度可能会促进重组蛋白的表达，另外IPTG对细菌本身具有一定毒性，建议多试几个浓度梯度，而且有时载体选择也会对你的蛋白表达起到一定影响，总之需要尝试，祝好运！
赞一下 回复此楼
15楼2013-03-19 09:37:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1.是否有包涵体-如果有，降低IPTG含量，降低诱导温度
2.密码子是否优化（有否稀有密码子）-如果有，换菌株，如rosetta
3.有没有移码？
4.如果是表达量少，OD600到1再加IPTG，诱导时间和温度也要优化
赞一下 回复此楼
16楼2013-03-19 11:16:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuahan

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by dhmdddd at 2013-03-14 21:55:11
阅读框不会有问题吧?可以考虑把诱导的温度改变下,多做几个温度,我们实验室就遇到常用的表达条件不表达,(25℃,0.4mM IPTG),提高温度后就有目的蛋白了

请问一下你说的阅读框是目的基因的阅读框吧？在做原核表达的时候，我知道基因的CDS序列，怎么找它的阅读框尼？设计两端带有酶切位点的引物是根据阅读框设计吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
17楼2014-04-30 20:18:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 田甜思 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭