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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pET-30a(+)不表达
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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] pET-30a(+)不表达

一直在做pET-30a(+)这个载体，但是不表达，我是在37度下培养的，都是在OD600=0.6-0.7之间加IPTG的，但就是不表达，质粒测序是正确的。各位帮忙解决下。谢谢！
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1楼 2013-03-12 20:40:31
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Jathan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你可以降低一下温度，一般降低温度可能会促进重组蛋白的表达，另外IPTG对细菌本身具有一定毒性，建议多试几个浓度梯度，而且有时载体选择也会对你的蛋白表达起到一定影响，总之需要尝试，祝好运！
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15楼2013-03-19 09:37:56
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你检测的是全菌蛋白吗？有跑胶的图片吗？
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2楼2013-03-13 00:38:15
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jian520yi

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白不表达和蛋白本身的性质，蛋白来源物种有很多关系。
不表达是很正常的。
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成功源自于不断的努力和坚持
3楼2013-03-13 08:37:29
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
诱导时采用几个IPTG浓度梯度，不同浓度的IPTG下对表达量有重要影响。
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4楼2013-03-13 10:51:00
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