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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 抽提RNA
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xiaodao1

金虫 (小有名气)

[求助] 抽提RNA

问问各位前辈，真菌（丝状真菌、毕赤酵母等）一般抽提RNA采用什么试剂盒比较好？
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1楼 2013-03-12 09:48:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒


我们实验室都用这种。感觉还可以。
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2楼2013-03-12 11:05:32
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jk_xdx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaodao1 at 2013-03-14 08:42:23
谢谢，这个写的很详细。以前也看到类似的RNA抽提方法，但是这样子，怎么保证没有RNA酶的存在？...

RNA酶肯定没有的，因为实验过程中用氯仿抽走了。不过用这种方法会有少量DNA污染，需要用DNaseI处理，如果你的实验要求不高，不处理也成。
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9楼2013-03-21 17:57:42
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
xiaodao1: 金币+5, ★有帮助 2013-03-22 09:06:22
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaodao1 at 2013-03-14 08:42:23
谢谢，这个写的很详细。以前也看到类似的RNA抽提方法，但是这样子，怎么保证没有RNA酶的存在？...

别太担心
自己摸索着做几次就明白了，rna酶也没那么可怕
提取的时候，只有后边洗沉淀的时候，75%的乙醇注意一下
还有最后的溶解的时候，无rna 酶的水
不知道你提了之后准备做什么
最好快点做，别做长期保存
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10楼2013-03-22 05:39:49
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普通回帖

xiaodao1

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-03-12 11:05:32
Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒


我们实验室都用这种。感觉还可以。

谢谢，我想提RNA，你们用过这种吗？
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3楼2013-03-12 20:27:11
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:28:31
我们不用试剂盒(量太少),
用如下方法.
总RNA的提取（Trizol法）：
1 液氮中研磨至粉末，
称取约100 mg粉末，置于1.5 ml离心管中；
2 加入1 ml Trizol，枪吸打，混匀（3 min）；
3 加入200 μl三氯甲烷，剧烈振荡15s，静置消化3-5min，待分层；
4 4℃，12000g离心15min；
5 小心取出离心管（勿晃动），取上清；
6 再加加入200 μl三氯甲烷，剧烈振荡15s，静置消化3-5min。4℃，12000g
离心15min，取上清；
7 加入500 μl异丙醇，混匀（勿剧烈），静置10min；
8 4℃，12000g离心10min；
9 弃上清，加入1 ml 75%乙醇，枪头吸打洗涤沉淀；
10 4℃，7500g离心5min；
11 弃上清，干燥。加灭菌ddH2O溶解RNA。
紫外分光光度计测定RNA的浓度及质量。RNA的浓度(ng/μl)计算方法：
OD260×40×稀释倍数。RNA的OD260/OD280比值应在1.8-2.0之间，并以1.5%的琼
脂糖电泳，检测RNA质量。
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4楼2013-03-13 16:41:29
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xiaodao1

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-03-13 16:41:29
我们不用试剂盒(量太少),
用如下方法.
总RNA的提取（Trizol法）：
1 液氮中研磨至粉末，
称取约100 mg粉末，置于1.5 ml离心管中；
2 加入1 ml Trizol，枪吸打，混匀（3 min）；
3 加入200 μl三氯甲烷，剧烈振 ...

谢谢，这个写的很详细。以前也看到类似的RNA抽提方法，但是这样子，怎么保证没有RNA酶的存在？
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5楼2013-03-14 08:42:23
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们实验室都是这样做的呢.
包括定量.半定量.
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6楼2013-03-14 08:49:35
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们实验室都是这样做的呢.
包括定量.半定量.

实验结果都还不错.你可以试试.
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7楼2013-03-14 08:50:23
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jk_xdx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-03-12 11:05:32
Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒


我们实验室都用这种。感觉还可以。

兄弟，人家问RNA提取……
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8楼2013-03-21 17:55:33
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