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抽提RNA
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| 问问各位前辈，真菌（丝状真菌、毕赤酵母等）一般抽提RNA采用什么试剂盒比较好？ |
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xiaoweiwei121
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10楼2013-03-22 05:39:49
liyu0355
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2楼2013-03-12 11:05:32
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liyu0355
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:28:31
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:28:31
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我们不用试剂盒(量太少), 用如下方法. 总RNA的提取（Trizol法）： 1 液氮中研磨至粉末， 称取约100 mg粉末，置于1.5 ml离心管中； 2 加入1 ml Trizol，枪吸打，混匀（3 min）； 3 加入200 μl三氯甲烷，剧烈振荡15s，静置消化3-5min，待分层； 4 4℃，12000g离心15min； 5 小心取出离心管（勿晃动），取上清； 6 再加加入200 μl三氯甲烷，剧烈振荡15s，静置消化3-5min。4℃，12000g 离心15min，取上清； 7 加入500 μl异丙醇，混匀（勿剧烈），静置10min； 8 4℃，12000g离心10min； 9 弃上清，加入1 ml 75%乙醇，枪头吸打洗涤沉淀； 10 4℃，7500g离心5min； 11 弃上清，干燥。加灭菌ddH2O溶解RNA。 紫外分光光度计测定RNA的浓度及质量。RNA的浓度(ng/μl)计算方法： OD260×40×稀释倍数。RNA的OD260/OD280比值应在1.8-2.0之间，并以1.5%的琼 脂糖电泳，检测RNA质量。 |
4楼2013-03-13 16:41:29
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