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xiaodao1

金虫 (小有名气)

[求助] 抽提RNA

问问各位前辈,真菌(丝状真菌、毕赤酵母等)一般抽提RNA采用什么试剂盒比较好?
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们实验室都是这样做的呢.
包括定量.半定量.
6楼2013-03-14 08:49:35
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒


我们实验室都用这种。感觉还可以。
2楼2013-03-12 11:05:32
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xiaodao1

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-03-12 11:05:32
Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒


我们实验室都用这种。感觉还可以。

谢谢,我想提RNA,你们用过这种吗?
3楼2013-03-12 20:27:11
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-13 20:28:31
我们不用试剂盒(量太少),
用如下方法.
总RNA的提取(Trizol法):
1 液氮中研磨至粉末,
称取约100 mg粉末,置于1.5 ml离心管中;
2 加入1 ml Trizol,枪吸打,混匀(3 min);
3 加入200 μl三氯甲烷,剧烈振荡15s,静置消化3-5min,待分层;
4 4℃,12000g离心15min;
5 小心取出离心管(勿晃动),取上清;
6 再加加入200 μl三氯甲烷,剧烈振荡15s,静置消化3-5min。4℃,12000g
离心15min,取上清;
7 加入500 μl异丙醇,混匀(勿剧烈),静置10min;
8 4℃,12000g离心10min;
9 弃上清,加入1 ml 75%乙醇,枪头吸打洗涤沉淀;
10 4℃,7500g离心5min;
11 弃上清,干燥。加灭菌ddH2O溶解RNA。
紫外分光光度计测定RNA的浓度及质量。RNA的浓度(ng/μl)计算方法:
OD260×40×稀释倍数。RNA的OD260/OD280比值应在1.8-2.0之间,并以1.5%的琼
脂糖电泳,检测RNA质量。
4楼2013-03-13 16:41:29
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