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TLC菜鸟

金虫 (正式写手)

[求助] DNA浓度计算

各位大虾,小弟开始做细菌DNA样品提取,发现文献采用紫外分光光度法测定DNA的含量,单位是ug/ml,不知道这个单位是怎么换算过来的,望指导啊~感激不尽~~
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只为活个问心无愧。。
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 搜索引擎是个好东西 2013-03-13 08:38:25
TLC菜鸟: 金币+5, 有帮助 2013-03-17 21:04:56
2楼2013-03-13 08:18:49
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

OD?
1.        ????????????Lambert??beer????????????
A????lgT????b c
A??????????????????O.D????
T????????? T??I / I???? I???????????????????????I??????????????????
??????????????????????????????L???N???1?????1????
b???????????cm??????????1.0cm ????????b=1cm??
C???????????mol/L????
???????????????????A??????????????????????????????C?????????
2.        DNA??RNA??OD?
2.1        ???
????????????й???????????????????????????????240~290nm???????????????????壬??????????????????????DNA???ε???????????260nm?????????????????3-25??????230nm???????????????????absorbance????A260?????A260??????????????RNA???ε???????????DNA?????????????????280nm????????????壬?κ?С??????????230nm?????????????????????A260?????????ú????????????????????к????????????????????????????1??g??mL???????????260nm?????????????????????DNA???????????0.020??????DNA??RNA???????????0.022?????????????????????A??-lgT????bc???c??A/??b????b????1cm????????????1OD?????50??g??mL?????DNA????40??g??mL??????DNA????RNA??????20??g??mL??????????
2.2        ????
DNA??RNA?????????????260nm??230nm??280nm?????????????????????DNA OD260??280??1.8-1.9??OD260??230?????2.0??????RNA OD260??280??1.9-2.0?????DNA???????1.8-1.9????????RNA??????????????DNA???С??1.8-1.9????????з??????????RNA?к??з?????????????????????OD260??230С??2.0????вд???λ?С?????????????
2.3        ???
DNA??RNA?????????????????????????A??-lgT????bc??????????????c??A/??b????????0.020????b??1cm????????c??A/??0.020??1????50??A????δ?????????????50??A????????????g??mL????50??A????????/1000??mg??mL??
2.4        ???????
1)        ???????????????????????????????????
2)        ??????OD260??? 0.15 ??1.0?????????????
3)        ????????????????????????????????0.25ul??ml????????С??0.25ul??ml?????????????
4)        ?????RNA????е???????????????????1.8??????????????????????????????RNA?????????????????е??????
5)        A260/A280???????DNA?????????ο?????A260/A280 ???????pH??????δ??pH?????????????????????????????????????10 mM Tris Cl, pH 8.5?м???????????DNA A260/A280?????1.8-2.0???????????????????????????
6)        ????OD????????????????????????????????е?OD???
7)        ??????220-330 nm ????????裬??????????????????????????OD260??????325 nm ????????????????????????????)
8)        DNA??????260 nm????????????OD??????????????????????1??OD?????DNA????????33 mg??
3楼2013-03-13 08:21:47
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
TLC菜鸟: 金币+1, 有帮助, 已知道怎么回事了,谢谢 2013-03-17 21:05:21
问题问得有点奇怪,紫外分光光度法都是有参照物,用已知浓度来推导未知浓度
4楼2013-03-13 08:38:03
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匿名

用户注销 (著名写手)

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-03-14 08:27:34
TLC菜鸟: 金币+2 2013-03-17 21:05:47
本帖仅楼主可见
5楼2013-03-13 09:23:06
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至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-03-14 08:27:45
TLC菜鸟: 金币+2, 有帮助 2013-03-17 21:05:41
1000ng/1000ul =1ug/ml
据朗波-比尔光吸收定律A=-lgT=εbc知,c=A/εb,而b通常为1cm,所以,通常以1OD值相当于50μg/mL双螺旋DNA,或40μg/mL单螺旋DNA(或RNA),或20μg/mL寡核苷酸计算。
总有一天我要修改用户名。
6楼2013-03-14 01:43:10
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