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1989zb

金虫 (小有名气)

[求助] pcr目的条带暗,怎么办呢??

最近一直pcr,可是目的条带总是很暗,该怎么优化条件呢?而且在胶回收后用同样的条件跑,连条带都没有,目的片段大小1500bp
反应条件:94度 4min 94度 30s  52度30s  72 度 90s  72度10min  
该怎么优化呢??

未命名.jpg



胶回收稀释后pcr.jpg
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1989zb

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by tongyanna at 2013-03-11 19:24:17
目的条带也不是很弱,提高退火温度2-3度若还是这样那就和温度没多大关系了,你的PCR体系可能需要优化,现在那种混合好的pcr体系有的就比较好用,你可以试试。再就是胶带回收时少加些水或TE。

混合好的pcr体系??什么意思!()(忘了说电泳是点的20ul)
13楼2013-03-11 20:19:25
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1989zb: 金币+1 2013-03-13 07:48:18
杂带比较多,可以升高退火温度,比如做个touchdown PCR,或者梯度PCR,找到最适退火温度,再PCR!
寻找真正的自我!
2楼2013-03-11 10:07:35
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1989zb

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-03-11 10:07:35
杂带比较多,可以升高退火温度,比如做个touchdown PCR,或者梯度PCR,找到最适退火温度,再PCR!

怎么才能让条带更亮呢
3楼2013-03-11 10:44:30
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无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1989zb at 2013-03-11 10:44:30
怎么才能让条带更亮呢...

第一次做体系大一点,切目的条带,回收,以回收产物为模板再P,再结合优化PCR条件因该会好些!
4楼2013-03-11 10:51:44
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