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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr目的条带暗，怎么办呢？？
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zhoulubin at 2013-03-11 18:51:43
回收后电泳不知道你上样量是多少，换句话说，回收后的浓度时多少。如果很低的话，干嘛要稀释那么多倍。我一般回收产物都不稀释的，直接p...

不稀释的 我也p 不出来问题是
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11楼2013-03-11 18:54:39
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tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-11 20:39:31
目的条带也不是很弱，提高退火温度2-3度若还是这样那就和温度没多大关系了，你的PCR体系可能需要优化，现在那种混合好的pcr体系有的就比较好用，你可以试试。再就是胶带回收时少加些水或TE。
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自己的路，自己快乐的走
12楼2013-03-11 19:24:17
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by tongyanna at 2013-03-11 19:24:17
目的条带也不是很弱，提高退火温度2-3度若还是这样那就和温度没多大关系了，你的PCR体系可能需要优化，现在那种混合好的pcr体系有的就比较好用，你可以试试。再就是胶带回收时少加些水或TE。

混合好的pcr体系？？什么意思!()(忘了说电泳是点的20ul)
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13楼2013-03-11 20:19:25
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yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试试提高退火温度吧，可以减少有效的减少非特异性扩增，实在不行，重新设计引物再来吧。没办法。
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14楼2013-03-11 23:34:42
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+2 2013-03-13 07:47:48
第一、升高退货温度，应该可以做一个温度梯度，从而选择最适温度。可以选择55~65度
第二、减少引物量以及模板量
第三、适当加大1~2个循环数
第四、电泳检测的时候，不需要点20ul
第五、重新设计引物
祝你实验顺利
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总有一天我要修改用户名。
15楼2013-03-12 17:07:26
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woke2008

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+1 2013-03-13 07:47:44
把退货温度提高到58度~~引物少加点，不是越多越好~
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忘记了该怎么忘记该怎么办！
16楼2013-03-12 17:23:04
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tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
1989zb: 金币+1 2013-03-13 07:47:22
我们做实验时有时候自己配制pcr体系就是自己加酶、dntp、模板、水。而有种PCR产品是公司买的那种，酶和DNTP已经配置好了，用的时候只加模板就行。很多公司有卖的
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自己的路，自己快乐的走
17楼2013-03-12 19:06:25
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li315yanwei

铁虫 (初入文坛)
杂带比较多，并且要比目的条带亮很多，建议提高退火温度或者减少dNTP的含量，如果只是想要回收片段的话，电泳点样量加大。
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命运就像指纹，尽管曲折但始终掌握在自己手中！
18楼2013-04-09 10:02:52
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by li315yanwei at 2013-04-09 10:02:52
杂带比较多，并且要比目的条带亮很多，建议提高退火温度或者减少dNTP的含量，如果只是想要回收片段的话，电泳点样量加大。

用的mix  谢谢
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19楼2013-04-09 19:34:27
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 137167741 at 2013-03-12 17:07:26
第一、升高退货温度，应该可以做一个温度梯度，从而选择最适温度。可以选择55~65度
第二、减少引物量以及模板量
第三、适当加大1~2个循环数
第四、电泳检测的时候，不需要点20ul
第五、重新设计引物
祝你实验顺 ...

谢谢
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20楼2013-04-09 19:34:36
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