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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr目的条带暗，怎么办呢？？
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1989zb

金虫 (小有名气)

[求助] pcr目的条带暗，怎么办呢？？

最近一直pcr,可是目的条带总是很暗，该怎么优化条件呢？而且在胶回收后用同样的条件跑，连条带都没有，目的片段大小1500bp
反应条件：94度 4min 94度 30s  52度30s  72 度 90s  72度10min  
该怎么优化呢？？

未命名.jpg



胶回收稀释后pcr.jpg
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1楼 2013-03-11 09:33:59
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+2 2013-03-13 07:47:48
第一、升高退货温度，应该可以做一个温度梯度，从而选择最适温度。可以选择55~65度
第二、减少引物量以及模板量
第三、适当加大1~2个循环数
第四、电泳检测的时候，不需要点20ul
第五、重新设计引物
祝你实验顺利
赞一下(2人) 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
15楼2013-03-12 17:07:26
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+1 2013-03-13 07:48:18
杂带比较多，可以升高退火温度，比如做个touchdown PCR，或者梯度PCR，找到最适退火温度，再PCR！
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寻找真正的自我！
2楼2013-03-11 10:07:35
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-03-11 10:07:35
杂带比较多，可以升高退火温度，比如做个touchdown PCR，或者梯度PCR，找到最适退火温度，再PCR！

怎么才能让条带更亮呢
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3楼2013-03-11 10:44:30
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无为书生

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1989zb at 2013-03-11 10:44:30
怎么才能让条带更亮呢...

第一次做体系大一点，切目的条带，回收，以回收产物为模板再P，再结合优化PCR条件因该会好些！
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4楼2013-03-11 10:51:44
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