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icanplay90

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有关拟南芥突变体分离鉴定不出WT

小弟今年研一,前几天导师给的突变体种子,拿到杂合体种下去,竟然分离不出WT,不知道什么原因,求哪位好心的师兄师姐帮忙分析解释一下,小弟在此谢过了
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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xy656691: 金币+5, 说不定本来就没有wt 2013-03-14 08:46:46
为什么必须会有WT呀?你老板跟你说肯定有吗?杂合体如果都是单杂还有吗?
要想确定有没有,可以先做个鉴定。
2楼2013-03-11 09:00:41
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irenescbg

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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xy656691: 金币+5, 你这还得借助有道词典看呢 2013-03-14 08:47:35
首先,前人给你的种子有可能是错的,
其次,你是怎么判断没有WT的?根据表型还是根据genotype的结果?表型不稳定是可能的,但是如果你做了genotyping就不一样了,你没有genotype到WT种子,但是目前你genotype的结果是什么?全部都是homozygous吗?如果是这样,说明给你的是homozygous,自然不会分离出WT;如果你genotype的结果是部分homozygous,部分heterozygous, 就是没有WT,有可能你的genotyping有问题,比如说genotype mutant allele的primer出问题了等等。所以每次做genotyping的时候都要有WT(另外种的)做control。不知道你的mutant是point mutation呢还是T-DNA插入突变体,这些需要具体问题具体分析。你给的信息太笼统,暂时只能说这么多。
请赐予我正能量吧!加油!
3楼2013-03-13 08:48:59
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icanplay90

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by irenescbg at 2013-03-13 08:48:59
首先,前人给你的种子有可能是错的,
其次,你是怎么判断没有WT的?根据表型还是根据genotype的结果?表型不稳定是可能的,但是如果你做了genotyping就不一样了,你没有genotype到WT种子,但是目前你genotype的结果 ...

抱歉,说的有些笼统,是heterogeneous种下后,后代的genotyping只有heterogeneous,没有WT,也没有homozygous。我的mutant是T-DNA插入的,问了导师也说让我换个引物试一下。。。纠结中,本来没有homozygous感觉会影响到生殖,挺好的,结果全是heterogeneous。谢谢师兄or师姐,受益匪浅
4楼2013-03-13 23:03:52
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icanplay90

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiemin217 at 2013-03-11 09:00:41
为什么必须会有WT呀?你老板跟你说肯定有吗?杂合体如果都是单杂还有吗?
要想确定有没有,可以先做个鉴定。

就是从ABRC直接买回来的T-DNA插入的突变体,第一代鉴定出的杂合体收种子以后种下去,鉴定的时候分离不出WT了
5楼2013-03-13 23:06:29
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xy656691

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by icanplay90 at 2013-03-13 23:03:52
抱歉,说的有些笼统,是heterogeneous种下后,后代的genotyping只有heterogeneous,没有WT,也没有homozygous。我的mutant是T-DNA插入的,问了导师也说让我换个引物试一下。。。纠结中,本来没有homozygous感觉会影 ...

买种子的时候,鉴定纯合体的引物就是已知道的吧
6楼2013-03-14 08:48:31
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by icanplay90 at 2013-03-13 23:03:52
抱歉,说的有些笼统,是heterogeneous种下后,后代的genotyping只有heterogeneous,没有WT,也没有homozygous。我的mutant是T-DNA插入的,问了导师也说让我换个引物试一下。。。纠结中,本来没有homozygous感觉会影 ...

表笑肯定不够准确的,用引物来P吧,这个可以肯定的是,你有1/4的WT,要不太违背规律了,到是从TAIR上回来的种子有些插入位点就不纯,还要鬼子的好,自己鉴定吧,引物网上都有,GOOGLE搜下T-DNA PRIMER就可以了。P下就什么都知道了。
PS:仁兄是北京的高校/科研单位吗?
7楼2013-03-14 09:16:48
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zhengbijuan

铁虫 (初入文坛)

在此,弱弱问个问题。拟南芥的转化貌似大部分用T3代做试验。在下是新手想问下,为什么用T3代,又从什么时候开始计算几代的?
8楼2013-04-25 00:42:10
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JinghuaZhang

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by irenescbg at 2013-03-13 08:48:59
首先,前人给你的种子有可能是错的,
其次,你是怎么判断没有WT的?根据表型还是根据genotype的结果?表型不稳定是可能的,但是如果你做了genotyping就不一样了,你没有genotype到WT种子,但是目前你genotype的结果 ...

大神,回复相当专业和详细

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敬往事一杯酒,再爱也不回头
9楼2018-05-31 21:55:36
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