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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化

我用镍柱纯化下来的蛋白在冻融一两次后，大部分蛋白就发生沉淀了，这是为什么？有方法避免吗？
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1楼 2013-03-02 15:21:01
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饼哥

木虫 (正式写手)
洗脱下来的蛋白液先存放于4℃，取少量样品马上用SDS-PAGE检测纯化效果，若纯化合格，立刻用透析法除去目的蛋白洗脱液中的咪唑。若有必要，还需用PEG包埋法或超滤法浓缩目的蛋白，提高蛋白浓度，因为蛋白质浓度过低会让蛋白质不稳定。最后将蛋白300-500μL/管分装，冻存于-80℃。还有，纠正你提及的一点，原核系统表达的蛋白，若是包涵体，则不具活性；而若是可溶性，则蛋白是有活性的，万不可一概而论。本人擅长用镍离子亲和层析纯化蛋白，有什么问题可以直接QQ我。
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爱科研，更爱小木虫！
9楼2013-03-05 13:50:14
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加5-50%的甘油试试。
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静心做事。
2楼2013-03-02 20:52:49
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangyhai at 2013-03-02 20:52:49
加5-50%的甘油试试。

为什么会沉淀呢？跟咪唑浓度有关吗？
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3楼2013-03-03 09:45:25
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白反复冻融会不会失活？蛋白失活应会沉淀吧
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男人，就要对自己狠一点！
4楼2013-03-03 14:06:18
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