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2011210200

金虫 (小有名气)


[交流] 想做细菌16rsDNA和真菌18rsDNA的DGGE,16srDNA V3区PCR是怎么回事?

最近开始做不同施肥对土壤细菌、真菌多样性的影响,由于是新手,想请教各位大牛几个问题:看到有些做DGGE是PCR了两次,第一次是16srDNAPCR,第二次是V3区PCR,想问一下为什么要P两次呢?有的文献只写了16srDNA PCR后就去跑DGGE了,V3区PCR是否有必要?18srDNA做DGGE是否需要再做某个区的PCR吗?请大牛们指教,不胜感激!
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oldrabbit01

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
扩增二次的是巢式PCR,第一次扩增大片段,第二次扩增其中一段小的,这样特异性好一些。
13楼2013-11-17 21:10:33
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userhung

禁虫 (文学泰斗)


★ ★ ★ ★ ★ ★
2011210200(金币+1): 谢谢参与
scelab: 金币+5, 谢谢 2013-02-26 19:33:53
4楼2013-02-26 18:03:36
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2011210200

金虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by userhung at 2013-02-26 18:03:36
http://www.doc88.com/p-15028461028.html
http://www.dxy.cn/bbs/topic/15718080
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2391806

那18srDNA做DGGE需要用某个区的引物扩增吗?
5楼2013-02-26 18:49:45
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DoRbIr

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
2011210200: 金币+8, 谢谢啊!明白了。 2013-02-28 14:20:13
DGGE一般跑的条带是500bp左右的,16S的全长是1.5K左右,所以不可能把整个16S拿去跑DGGE的。有的时候,为增加PCR的成功率,会先扩增16S全长,再特定扩增某个区域,毕竟DGGE的引物往往是要加GC-clamp的。你说的只写了16srDNA也应该是某个区域,而不是全长,你可以再看一下。18S也是同理的。
7楼2013-02-27 16:23:46
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