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1989zb

金虫 (小有名气)

[求助] 尿囊液提取病毒

在尿囊液中提取RNA病毒,选用什么试剂或者试剂盒效果好呢??
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11wm11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
1989zb: 金币+5 2013-03-06 09:15:23
250ul病毒液+750ul Trizol,轻轻颠倒数次,混匀
加入200ul氯仿,颠倒混匀15次,冰浴5min(提前放在-20冰箱)
4℃  13000rpm 15min
小心吸取上清,加入750ul新离心管,加入等量异丙醇(提前放在-20冰箱),颠倒混匀,冰浴10min
4℃  13000rpm 15min
弃上清,加入1ml75%DEPC酒精(提前放在-20冰箱),4℃  13000rpm  5min,弃上清,瞬离,黄枪头吸净上清,转一周,瞬离,白枪头吸净。
风干,(5-10min),加入10ul 无RNA酶水,轻拍,转动,瞬离,
反转录即可

(全程要尽可能避免核酸酶污染,带手套,口罩,所用枪头须是提RNA专用的)
8楼2013-03-05 17:40:19
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vetjacky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励新虫发帖交流,欢迎道生物医药区 2013-02-25 20:01:49
我没有用试剂盒,用的TriZol Reagent RNA,效果还是不错的,希望能帮到你。
2楼2013-02-25 14:57:17
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1989zb

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by vetjacky at 2013-02-25 14:57:17
我没有用试剂盒,用的TriZol Reagent RNA,效果还是不错的,希望能帮到你。

我用TriZol 试剂提过,提不出来,只能提组织和细胞这些……你用的是是那种型号吗??能提尿囊液
3楼2013-02-25 18:20:28
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11wm11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们用TriZol 提取流感病毒的RNA没有问题,试剂盒用过QIAGEN的,挺好用的。
4楼2013-02-25 20:26:26
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1989zb

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 11wm11 at 2013-02-25 20:26:26
我们用TriZol 提取流感病毒的RNA没有问题,试剂盒用过QIAGEN的,挺好用的。

你用的TRIzol 试剂还是TRIzol LS试剂啊 。我在网上查了哈说的都是TRIzol LS试剂能提取液体……
5楼2013-02-26 09:50:47
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11wm11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 11wm11 at 2013-02-25 20:26:26
我们用TriZol 提取流感病毒的RNA没有问题,试剂盒用过QIAGEN的,挺好用的。

我看了一下  我们用的就是普通的TRIzol® Reagent ,楼主可以打电话问一下试剂公司,一般都会有的~貌似也有很多牌子的。我们实验室做流感病毒很多年一直用它,所以说用的方法对的话应该不会有问题的。祝你好运~
6楼2013-03-03 11:16:39
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1989zb

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 11wm11 at 2013-03-03 11:16:39
我看了一下  我们用的就是普通的TRIzol® Reagent ,楼主可以打电话问一下试剂公司,一般都会有的~貌似也有很多牌子的。我们实验室做流感病毒很多年一直用它,所以说用的方法对的话应该不会有问题的。祝你好运 ...

能把你们的操作方法贴出来吧
7楼2013-03-05 08:36:04
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1989zb

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 11wm11 at 2013-03-05 17:40:19
250ul病毒液+750ul Trizol,轻轻颠倒数次,混匀
加入200ul氯仿,颠倒混匀15次,冰浴5min(提前放在-20冰箱)
4℃  13000rpm 15min
小心吸取上清,加入750ul新离心管,加入等量异丙醇(提前放在-20冰箱),颠倒混 ...

当时我做的时候 是按照1:5的比例加的尿囊液和trizol 没有提出来  一起提组织提的还不错 ,不知道咋回事了
9楼2013-03-06 09:16:47
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11wm11

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 1989zb at 2013-03-06 09:16:47
当时我做的时候 是按照1:5的比例加的尿囊液和trizol 没有提出来  一起提组织提的还不错 ,不知道咋回事了...

那你按照我们这个方法试试看,我只提过流感病毒的RNA,没做过其他的~
10楼2013-03-06 15:31:59
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