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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 尿囊液提取病毒
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1989zb

金虫 (小有名气)

[求助] 尿囊液提取病毒

在尿囊液中提取RNA病毒，选用什么试剂或者试剂盒效果好呢？？
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1楼 2013-02-25 09:46:49
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11wm11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
1989zb: 金币+5 2013-03-06 09:15:23
250ul病毒液+750ul Trizol，轻轻颠倒数次，混匀
加入200ul氯仿，颠倒混匀15次，冰浴5min（提前放在-20冰箱）
4℃  13000rpm 15min
小心吸取上清，加入750ul新离心管，加入等量异丙醇（提前放在-20冰箱），颠倒混匀，冰浴10min
4℃  13000rpm 15min
弃上清，加入1ml75%DEPC酒精（提前放在-20冰箱），4℃  13000rpm  5min，弃上清，瞬离，黄枪头吸净上清，转一周，瞬离，白枪头吸净。
风干，（5-10min），加入10ul 无RNA酶水，轻拍，转动，瞬离，
反转录即可

（全程要尽可能避免核酸酶污染，带手套，口罩，所用枪头须是提RNA专用的）
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8楼2013-03-05 17:40:19
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vetjacky

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励新虫发帖交流，欢迎道生物医药区 2013-02-25 20:01:49
我没有用试剂盒，用的TriZol Reagent RNA，效果还是不错的，希望能帮到你。
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2楼2013-02-25 14:57:17
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by vetjacky at 2013-02-25 14:57:17
我没有用试剂盒，用的TriZol Reagent RNA，效果还是不错的，希望能帮到你。

我用TriZol 试剂提过，提不出来，只能提组织和细胞这些……你用的是是那种型号吗？？能提尿囊液
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3楼2013-02-25 18:20:28
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11wm11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们用TriZol 提取流感病毒的RNA没有问题，试剂盒用过QIAGEN的，挺好用的。
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4楼2013-02-25 20:26:26
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 11wm11 at 2013-02-25 20:26:26
我们用TriZol 提取流感病毒的RNA没有问题，试剂盒用过QIAGEN的，挺好用的。

你用的TRIzol 试剂还是TRIzol LS试剂啊 。我在网上查了哈说的都是TRIzol LS试剂能提取液体……
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5楼2013-02-26 09:50:47
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11wm11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 11wm11 at 2013-02-25 20:26:26
我们用TriZol 提取流感病毒的RNA没有问题，试剂盒用过QIAGEN的，挺好用的。

我看了一下  我们用的就是普通的TRIzol® Reagent ，楼主可以打电话问一下试剂公司，一般都会有的~貌似也有很多牌子的。我们实验室做流感病毒很多年一直用它，所以说用的方法对的话应该不会有问题的。祝你好运~
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6楼2013-03-03 11:16:39
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 11wm11 at 2013-03-03 11:16:39
我看了一下  我们用的就是普通的TRIzol® Reagent ，楼主可以打电话问一下试剂公司，一般都会有的~貌似也有很多牌子的。我们实验室做流感病毒很多年一直用它，所以说用的方法对的话应该不会有问题的。祝你好运 ...

能把你们的操作方法贴出来吧
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7楼2013-03-05 08:36:04
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1989zb

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 11wm11 at 2013-03-05 17:40:19
250ul病毒液+750ul Trizol，轻轻颠倒数次，混匀
加入200ul氯仿，颠倒混匀15次，冰浴5min（提前放在-20冰箱）
4℃  13000rpm 15min
小心吸取上清，加入750ul新离心管，加入等量异丙醇（提前放在-20冰箱），颠倒混 ...

当时我做的时候 是按照1:5的比例加的尿囊液和trizol 没有提出来  一起提组织提的还不错 ，不知道咋回事了
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9楼2013-03-06 09:16:47
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11wm11

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 1989zb at 2013-03-06 09:16:47
当时我做的时候 是按照1:5的比例加的尿囊液和trizol 没有提出来  一起提组织提的还不错 ，不知道咋回事了...

那你按照我们这个方法试试看，我只提过流感病毒的RNA，没做过其他的~
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10楼2013-03-06 15:31:59
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