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daniel_tang

金虫 (小有名气)

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[交流] 基因敲除中maker的方向，求討論

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Datsenko, K.A. & Wanner, B.L. One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products. Proceedings of the National Academy of Sciences 97, 6640-6645 (2000).

E. coli ??Keio collecton ??????@????????

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1楼 2013-01-31 16:14:15

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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

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虫号: 2222431

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
daniel_tang: 金币+2 2013-02-01 23:12:06

只有marker的promoter（medium强度的promoter）影响外面表型，所以最后要敲掉，纠结外面的启动子影响没有意义，多表达那点东西99.99%也不会对筛选有影响（离启动子远端的基因表达水平越远越低，而且一般构建marker会带一个简单的terminater吧）。
敲多少，是否敲启动子，是否敲startcodon，是否要inframe是根据你的实验目的决定的（比如一个启动子后面好几个ORF之类的），而不是根据paper决定的