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daniel_tang

金虫 (小有名气)


[交流] 基因敲除中maker的方向,求討論

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Datsenko, K.A. & Wanner, B.L. One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products. Proceedings of the National Academy of Sciences 97, 6640-6645 (2000).

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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daniel_tang: 金币+3 2013-02-01 13:00:51
一般是需要筛选基因与敲除基因方向一致,否则,由于筛选基因自身有启动子,反方向插入可能造成互补链DNA的表达。
4楼2013-02-01 07:57:28
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)


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daniel_tang: 金币+2 2013-02-01 10:42:12
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-02-01 10:54:27
敲除基因时侯, 根据operon,有时候是连着promoter一起敲掉的
marker自带constitutive promoter 不需要考虑方向。
2楼2013-02-01 02:38:20
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sumoeric

金虫 (小有名气)


★ ★
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daniel_tang: 金币+1 2013-02-01 13:00:33
引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-02-01 02:38:20
敲除基因时侯, 根据operon,有时候是连着promoter一起敲掉的
marker自带constitutive promoter 不需要考虑方向。

顶一下楼上,我也是做这方面的,之前也挺烦的,其实就像楼上说的同启动子有关,只要有启动子就不用考虑方向
3楼2013-02-01 07:50:09
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
反正最后插入的marker要删掉的,一般来说表达点其他基因无所谓,不过筛选使用的抗生素最好用CM/KM这种可信度比较好的,不要用Amp/Tet啥的。。 最后看表型一般是看loop out的菌株的。
除非你要敲的对象基因致死  或者附近有影响生长的基因啥的。
5楼2013-02-01 11:05:36
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