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额敏的雪

金虫 (著名写手)

[求助] pMD18-T载体不需要酶切吗已有1人参与

为什么将带有相应酶切位点的基因连入pMD18-T载体时不需要对载体进行酶切?
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pandezhuo

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 左手abby at 2017-09-24 22:54:57
我最近在做加A,但是总是加不上,请问你做加A都是怎么的
...

如果你直接用高保真酶PCR的话,首先切胶回收纯化OCR产物。接着有种简单的做法加A,反应体系为PCR纯化物25微升,蓝酶Trans Direct PCR SuperMix 25微升,反应程序为72℃,30分钟。然后纯化PCR产物,进行下一步pMD18-T连接

发自小木虫Android客户端
11楼2017-10-16 13:46:38
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
额敏的雪: 金币+2 2013-01-28 15:45:44
一般的taq酶做PCR时,PCR产物末端有突出的碱基A,pMD18-T载体有突出的碱基T,AT是互补的,故可以连接上
2楼2013-01-28 13:17:19
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武京帅

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用的是TA克隆的方法  如楼上所说 不用再切了就
To be all you what you can be!
3楼2013-01-28 15:09:02
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
嗯,楼上两位说的很正确,附和下!
生物化学与分子生物学
4楼2013-01-28 17:23:16
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