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三吉草

铜虫 (小有名气)

[求助] 求指点,大家看下这样的带跑的正常吗?

我要构建一个载体,目的基因1500bp左右,扩完基因后条带位置正确(DL2000,条带在2000和1000中间),可是酶切后,目的片段位置却十分接近2000bp的位置,而且在2000bp之后隐约还有一条杂带,这是怎么回事?按道理把扩下来的基因酶切最多也不会超过1500bp,为什会出现大于2000bp的条带啊?而且目的条带还十分接近2000bp?求指点!

aaa
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henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
三吉草: 金币+2, 有帮助 2013-01-27 09:37:19
三吉草: 金币+1 2013-01-27 09:38:08
凝胶的浓度是多大的?0.8%-1%的?我感觉是正常的,因为凝胶的分离并不是一个线性的关系,而且不同凝胶的浓度和电泳的时间都可以影响最终电泳的形态。

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2楼2013-01-26 07:56:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
三吉草: 金币+1 2013-01-27 09:37:39
从胶上定大小不是很准确,有时候就是这样。虽然看起来与实际大小有出入。既然你确定开始克隆的片段正确,你可以拿去测序。

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3楼2013-01-26 08:17:21
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
三吉草: 金币+1, 有帮助 2013-01-27 09:37:04
上述两个同仁说的很有理,marker只是一个对比的,加上跑胶的原因,一般不能精确的提供大小比对,只是一个参考。要想确切的知道,到底是不是,最好的办法还是测序!

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生物化学与分子生物学
4楼2013-01-26 10:24:30
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xy656691

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by henryxue at 2013-01-26 07:56:23
凝胶的浓度是多大的?0.8%-1%的?我感觉是正常的,因为凝胶的分离并不是一个线性的关系,而且不同凝胶的浓度和电泳的时间都可以影响最终电泳的形态。

那很亮的那条目的条带之后还有一条模糊的带,那是杂带吗
5楼2013-01-26 11:23:32
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henryxue

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xy656691 at 2013-01-26 11:23:32
那很亮的那条目的条带之后还有一条模糊的带,那是杂带吗...

应该是
6楼2013-01-26 14:05:58
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by xy656691 at 2013-01-26 11:23:32
那很亮的那条目的条带之后还有一条模糊的带,那是杂带吗...

可能是你在酶切的时候有什么杂质污染了DNA,如果导致DNA的性状发生变化,电泳跑到后面也说不准的

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学习中
7楼2013-01-26 14:08:04
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三吉草

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by henryxue at 2013-01-26 07:56:23
凝胶的浓度是多大的?0.8%-1%的?我感觉是正常的,因为凝胶的分离并不是一个线性的关系,而且不同凝胶的浓度和电泳的时间都可以影响最终电泳的形态。

1%的胶,可能我的电泳时间也有点短,至少1000和750bp的带都没有跑开。但是对于那条2000bp之后的杂带很是疑惑,不知怎么回事?不过还是谢谢你!
8楼2013-01-26 16:27:16
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三吉草

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-26 08:17:21
从胶上定大小不是很准确,有时候就是这样。虽然看起来与实际大小有出入。既然你确定开始克隆的片段正确,你可以拿去测序。

是的,谢谢
9楼2013-01-26 16:28:12
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三吉草

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2013-01-26 10:24:30
上述两个同仁说的很有理,marker只是一个对比的,加上跑胶的原因,一般不能精确的提供大小比对,只是一个参考。要想确切的知道,到底是不是,最好的办法还是测序!

谢谢你,测序只能鉴别那条最亮的带是不是我要的目的条带,但是对杂带的出现很不解,如果说是污染了,两个样出现同样的杂带。。。这概率
10楼2013-01-26 16:31:50
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