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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求指点，大家看下这样的带跑的正常吗？
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三吉草

铜虫 (小有名气)

[求助] 求指点，大家看下这样的带跑的正常吗？

我要构建一个载体，目的基因1500bp左右，扩完基因后条带位置正确（DL2000，条带在2000和1000中间），可是酶切后，目的片段位置却十分接近2000bp的位置，而且在2000bp之后隐约还有一条杂带，这是怎么回事？按道理把扩下来的基因酶切最多也不会超过1500bp，为什会出现大于2000bp的条带啊？而且目的条带还十分接近2000bp？求指点！

aaa
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1楼 2013-01-25 18:03:36
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henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
三吉草: 金币+2, ★有帮助 2013-01-27 09:37:19
三吉草: 金币+1 2013-01-27 09:38:08
凝胶的浓度是多大的？0.8%-1%的？我感觉是正常的，因为凝胶的分离并不是一个线性的关系，而且不同凝胶的浓度和电泳的时间都可以影响最终电泳的形态。
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三吉草
2楼2013-01-26 07:56:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
三吉草: 金币+1 2013-01-27 09:37:39
从胶上定大小不是很准确，有时候就是这样。虽然看起来与实际大小有出入。既然你确定开始克隆的片段正确，你可以拿去测序。
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三吉草
3楼2013-01-26 08:17:21
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
三吉草: 金币+1, ★有帮助 2013-01-27 09:37:04
上述两个同仁说的很有理，marker只是一个对比的，加上跑胶的原因，一般不能精确的提供大小比对，只是一个参考。要想确切的知道，到底是不是，最好的办法还是测序！
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三吉草
生物化学与分子生物学
4楼2013-01-26 10:24:30
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xy656691

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by henryxue at 2013-01-26 07:56:23
凝胶的浓度是多大的？0.8%-1%的？我感觉是正常的，因为凝胶的分离并不是一个线性的关系，而且不同凝胶的浓度和电泳的时间都可以影响最终电泳的形态。

那很亮的那条目的条带之后还有一条模糊的带，那是杂带吗
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5楼2013-01-26 11:23:32
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henryxue

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xy656691 at 2013-01-26 11:23:32
那很亮的那条目的条带之后还有一条模糊的带，那是杂带吗...

应该是
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6楼2013-01-26 14:05:58
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by xy656691 at 2013-01-26 11:23:32
那很亮的那条目的条带之后还有一条模糊的带，那是杂带吗...

可能是你在酶切的时候有什么杂质污染了DNA，如果导致DNA的性状发生变化，电泳跑到后面也说不准的
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三吉草
学习中
7楼2013-01-26 14:08:04
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三吉草

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by henryxue at 2013-01-26 07:56:23
凝胶的浓度是多大的？0.8%-1%的？我感觉是正常的，因为凝胶的分离并不是一个线性的关系，而且不同凝胶的浓度和电泳的时间都可以影响最终电泳的形态。

1%的胶，可能我的电泳时间也有点短，至少1000和750bp的带都没有跑开。但是对于那条2000bp之后的杂带很是疑惑，不知怎么回事？不过还是谢谢你！
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8楼2013-01-26 16:27:16
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三吉草

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-26 08:17:21
从胶上定大小不是很准确，有时候就是这样。虽然看起来与实际大小有出入。既然你确定开始克隆的片段正确，你可以拿去测序。

是的，谢谢
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9楼2013-01-26 16:28:12
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三吉草

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2013-01-26 10:24:30
上述两个同仁说的很有理，marker只是一个对比的，加上跑胶的原因，一般不能精确的提供大小比对，只是一个参考。要想确切的知道，到底是不是，最好的办法还是测序！

谢谢你，测序只能鉴别那条最亮的带是不是我要的目的条带，但是对杂带的出现很不解，如果说是污染了，两个样出现同样的杂带。。。这概率
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10楼2013-01-26 16:31:50
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