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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求指点，大家看下这样的带跑的正常吗？
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三吉草

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by WilliamHJ at 2013-01-26 14:08:04
可能是你在酶切的时候有什么杂质污染了DNA，如果导致DNA的性状发生变化，电泳跑到后面也说不准的...

可能吧，就是两管同时污染，这概率。。。
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11楼2013-01-26 16:33:32
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kongqi4321

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我感觉还是看一下扩增的引物是否正确，
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我们还可以做的更好！
12楼2013-01-26 20:22:42
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yipinyoulan

银虫 (小有名气)
首先这是正常情况。
1、你的Maker有一种没跑开的感觉，是不是可以配1.5%~2.0%胶，多跑一会（50min），试试呢？如果真是1500bp，那就会在前两带之间。你确认下目的基因是不是1500.
2、有大于2000bp的带很正常啊，因为你的引物特异性不高吗，只要有你的目的条带即可，想要除掉杂带，就胶回收啊，必要的情况下你可以刚P出来就胶回收一次，酶切完在回收一次。这样基本上没什么的问题了。
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13楼2013-01-27 17:15:22
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫
首先，通过跑胶来看分子量不太精确，同时你这张图是回收胶，用小胶孔的胶，多跑一点时间，可能看起来就不是现在这个情况了。测序是个不错的选择。
其次，那条暗一点的条带很可能是非特异性扩增的条带，这个跟你的引物不够专一和模板复杂性高等情况相关，不太像是污染。
祝好运。
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毕业回望科研路，满目疮痍一身土
14楼2013-01-27 21:29:02
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三吉草

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yipinyoulan at 2013-01-27 17:15:22
首先这是正常情况。
1、你的Maker有一种没跑开的感觉，是不是可以配1.5%~2.0%胶，多跑一会（50min），试试呢？如果真是1500bp，那就会在前两带之间。你确认下目的基因是不是1500.
2、有大于2000bp的带很正常啊，因 ...

谢谢你，
首先，我扩的片段是1560bp，我想目标位置还是应该在1000和2000居中的位置吧。其次，我配的胶浓度是1%，我是想浓度大的胶可能不利于大片段的分离，所以就用的1%的。接着，酶切的底物也是我扩完基因回收的，回收的时候图可以看出我的引物特异性还可以。按道理我回收的基因片段应该是比较干净的呀，怎么又会在酶切的时候出现杂带呢？我非常不解，还望你能帮我想想办法？感激不尽
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15楼2013-01-29 05:56:41
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三吉草

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by qiyaocheng at 2013-01-27 21:29:02
首先，通过跑胶来看分子量不太精确，同时你这张图是回收胶，用小胶孔的胶，多跑一点时间，可能看起来就不是现在这个情况了。测序是个不错的选择。
其次，那条暗一点的条带很可能是非特异性扩增的条带，这个跟你的引 ...

谢谢你，
我跑胶用的是打孔的梳子，我截的图可能把图变小了。我会试试让胶多跑会儿。另外你说的模版复杂性高，我的模板是扩完基因跑胶回收的，按道理应该比较纯才对呀，这条非特异性带怎么会出现呢，还望指点
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16楼2013-01-29 06:00:05
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
继续构建吧
没啥问题
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17楼2013-01-29 06:47:24
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三吉草

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2013-01-29 06:47:24
继续构建吧
没啥问题

恩，我接着来
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18楼2013-01-29 11:33:01
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