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三吉草

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by WilliamHJ at 2013-01-26 14:08:04
可能是你在酶切的时候有什么杂质污染了DNA,如果导致DNA的性状发生变化,电泳跑到后面也说不准的...

可能吧,就是两管同时污染,这概率。。。
11楼2013-01-26 16:33:32
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kongqi4321

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我感觉还是看一下扩增的引物是否正确,
我们还可以做的更好!
12楼2013-01-26 20:22:42
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yipinyoulan

银虫 (小有名气)

首先这是正常情况。
1、你的Maker有一种没跑开的感觉,是不是可以配1.5%~2.0%胶,多跑一会(50min),试试呢?如果真是1500bp,那就会在前两带之间。你确认下目的基因是不是1500.
2、有大于2000bp的带很正常啊,因为你的引物特异性不高吗,只要有你的目的条带即可,想要除掉杂带,就胶回收啊,必要的情况下你可以刚P出来就胶回收一次,酶切完在回收一次。这样基本上没什么的问题了。
13楼2013-01-27 17:15:22
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qiyaocheng

木虫 (小有名气)

老虫

首先,通过跑胶来看分子量不太精确,同时你这张图是回收胶,用小胶孔的胶,多跑一点时间,可能看起来就不是现在这个情况了。测序是个不错的选择。
其次,那条暗一点的条带很可能是非特异性扩增的条带,这个跟你的引物不够专一和模板复杂性高等情况相关,不太像是污染。
祝好运。
毕业回望科研路,满目疮痍一身土
14楼2013-01-27 21:29:02
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三吉草

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by yipinyoulan at 2013-01-27 17:15:22
首先这是正常情况。
1、你的Maker有一种没跑开的感觉,是不是可以配1.5%~2.0%胶,多跑一会(50min),试试呢?如果真是1500bp,那就会在前两带之间。你确认下目的基因是不是1500.
2、有大于2000bp的带很正常啊,因 ...

谢谢你,
首先,我扩的片段是1560bp,我想目标位置还是应该在1000和2000居中的位置吧。其次,我配的胶浓度是1%,我是想浓度大的胶可能不利于大片段的分离,所以就用的1%的。接着,酶切的底物也是我扩完基因回收的,回收的时候图可以看出我的引物特异性还可以。按道理我回收的基因片段应该是比较干净的呀,怎么又会在酶切的时候出现杂带呢?我非常不解,还望你能帮我想想办法?感激不尽
15楼2013-01-29 05:56:41
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三吉草

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by qiyaocheng at 2013-01-27 21:29:02
首先,通过跑胶来看分子量不太精确,同时你这张图是回收胶,用小胶孔的胶,多跑一点时间,可能看起来就不是现在这个情况了。测序是个不错的选择。
其次,那条暗一点的条带很可能是非特异性扩增的条带,这个跟你的引 ...

谢谢你,
我跑胶用的是打孔的梳子,我截的图可能把图变小了。我会试试让胶多跑会儿。另外你说的模版复杂性高,我的模板是扩完基因跑胶回收的,按道理应该比较纯才对呀,这条非特异性带怎么会出现呢,还望指点
16楼2013-01-29 06:00:05
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

继续构建吧
没啥问题
17楼2013-01-29 06:47:24
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三吉草

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2013-01-29 06:47:24
继续构建吧
没啥问题

恩,我接着来
18楼2013-01-29 11:33:01
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