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三吉草

铜虫 (小有名气)

[求助] 求指点,大家看下这样的带跑的正常吗?

我要构建一个载体,目的基因1500bp左右,扩完基因后条带位置正确(DL2000,条带在2000和1000中间),可是酶切后,目的片段位置却十分接近2000bp的位置,而且在2000bp之后隐约还有一条杂带,这是怎么回事?按道理把扩下来的基因酶切最多也不会超过1500bp,为什会出现大于2000bp的条带啊?而且目的条带还十分接近2000bp?求指点!

aaa
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三吉草

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by qiyaocheng at 2013-01-27 21:29:02
首先,通过跑胶来看分子量不太精确,同时你这张图是回收胶,用小胶孔的胶,多跑一点时间,可能看起来就不是现在这个情况了。测序是个不错的选择。
其次,那条暗一点的条带很可能是非特异性扩增的条带,这个跟你的引 ...

谢谢你,
我跑胶用的是打孔的梳子,我截的图可能把图变小了。我会试试让胶多跑会儿。另外你说的模版复杂性高,我的模板是扩完基因跑胶回收的,按道理应该比较纯才对呀,这条非特异性带怎么会出现呢,还望指点
16楼2013-01-29 06:00:05
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henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
三吉草: 金币+2, 有帮助 2013-01-27 09:37:19
三吉草: 金币+1 2013-01-27 09:38:08
凝胶的浓度是多大的?0.8%-1%的?我感觉是正常的,因为凝胶的分离并不是一个线性的关系,而且不同凝胶的浓度和电泳的时间都可以影响最终电泳的形态。

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2楼2013-01-26 07:56:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
三吉草: 金币+1 2013-01-27 09:37:39
从胶上定大小不是很准确,有时候就是这样。虽然看起来与实际大小有出入。既然你确定开始克隆的片段正确,你可以拿去测序。

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3楼2013-01-26 08:17:21
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
三吉草: 金币+1, 有帮助 2013-01-27 09:37:04
上述两个同仁说的很有理,marker只是一个对比的,加上跑胶的原因,一般不能精确的提供大小比对,只是一个参考。要想确切的知道,到底是不是,最好的办法还是测序!

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生物化学与分子生物学
4楼2013-01-26 10:24:30
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