| 查看: 4072 | 回复: 24 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
senlinpeiyu铜虫 (小有名气)
|
[求助]
植物山茶过氧化氢酶（CAT）活性测定问题 已有2人参与
|
|||
|
1、过氧化氢酶（CAT）活性测定 （1）试剂配制： A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4•12H2O（分子量358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4•2H2O（分子量156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。 0.15mol/L磷酸缓冲液（PBS，pH7.0）：取A母液(Na2HPO4) 457.5 ml 和B母液(NaH2PO4) 292.5 ml混合后用蒸馏水定容至1000ml。 （2）反应液配制：取200ml PBS（0.15M，pH7.0），加入0.3092ml 30%的H2O2（原液）摇匀即可。 （3）酶液制备：取0.1g（因为叶片非常少，取了0.1g的样）叶片，洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。酶液提取出来后，当天没有测定，于是把酶液保存在4度冰箱里面。 （4）样品测定：取3ml反应液加入50ul 山茶酶液，以PBS为对照调零，测定OD240（紫外）（测定40s）。 （5）酶活性计算：以每min OD值减少0.01为1个酶活性单位（u）。 CAT=[ΔA240×Vt ]/（W×Vs×0.01×t） (u/g min) ΔA240：为反应时间内吸光度的变化；W为样品鲜重(g)；t为反应时间(min)；Vt为提取酶液总体积（ml， 1.6ml）；Vs为测定时取用酶液体积（ml, 0.1ml）。 用紫外可见分光光度计，石英比色皿，测定的时候用缓冲液做空白调零。然后测的时候，先加反应液3ml，再加酶液0.1ml，摇匀。然后计时，测定吸光度的减小情况。本来测定的数据应该是减小的，0s时吸光度最大，40s时吸光度最小，呈下降趋势。但结果我测出来数据一直增大，这是为什么呢？是药品的问题，还是这个方法不适合测定山茶的过氧化氢酶的活性，还是其他的问题。 请大侠赐教！！！非常非常感谢！！！ [ Last edited by senlinpeiyu on 2013-1-23 at 16:55 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
感觉普通人已经没办法玩了，躺平是唯一的出路。
已经有26人回复
-
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有245人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有7人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有2人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
23楼2015-10-26 22:30:27
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - APEPI: 64
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
senlinpeiyu: 金币+1, ★有帮助, 我又磨了一批样，离心出来了，又测定了一次，还是不可以，步骤还是同样的步骤。 2013-01-23 19:08:58
xy656691: 金币+2, 感谢积极应助 2013-01-23 19:50:02
感谢参与，应助指数 +1
senlinpeiyu: 金币+1, ★有帮助, 我又磨了一批样，离心出来了，又测定了一次，还是不可以，步骤还是同样的步骤。 2013-01-23 19:08:58
xy656691: 金币+2, 感谢积极应助 2013-01-23 19:50:02
|
我以前也是用这种方法测CAT，该方法用于山茶应该也没有问题。你可以试试如下几条： 1 反应液检测前现用现配，加大H2O2用量试试（H2O2一般不会有什么问题，我以前都是放4度冰箱保存，但为了保险起见，重新买一瓶用吧） 2 加大样品用量，试试100 或200微升 3 你手头有没有商品过氧化氢酶，配一点过氧化氢酶溶液，用你的方法测一下，看吸光度如何变化。 |
2楼2013-01-23 17:32:25
xy656691
金虫 (正式写手)
- APEPI: 1
- 应助: 37 (小学生)
- 贵宾: 0.248
- 金币: 1404.8
- 散金: 772
- 红花: 12
- 帖子: 751
- 在线: 158.2小时
- 虫号: 1681902
- 注册: 2012-03-11
- 性别: GG
- 专业: 免疫学研究新技术与新方法
3楼2013-01-24 20:56:54
senlinpeiyu
铜虫 (小有名气)
 |
4楼2013-01-25 21:52:47
