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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 换了仪器和柱子后，HPLC标品出峰过早，求助。不甚感激~~~
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Jireh

铜虫 (小有名气)

[求助] 换了仪器和柱子后，HPLC标品出峰过早，求助。不甚感激~~~

之前用岛津的HPLC紫外检测，250mm 普通的C18柱，用的是水：乙腈=90:10，检测的样品在11min出峰。一切很正常。
换了地方做实验，Jasco的HPLC DAD检测器（似乎更好了），用150mm或者100mm的C18柱，用相同的方法，或者水：乙腈=95:5，检测出来的峰和进样峰完全重叠，在1.8min处就出峰了。只不过相比起对照，峰更高，而且该标品的光谱图和文献的相比，很相似。大概能确定样品没有问题。
该仪器也运转正常，其他人的样品能跑的很好。

所以，现在的问题是，如何让样品出峰晚点阿？
试过 好多次了，捉急死人了。。。求助各位大虾阿~~~
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1楼2013-01-23 00:22:03
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ruiyi1101

新虫 (小有名气)

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crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-01-23 10:37:02
Jireh: 金币+3 2013-01-23 18:30:25
1. 确认Jasco的HPLC，仪器是否正常：查阅最近一次仪器校验记录（一般每年至少一次），主要是流速检定项是否符合国家计量检定规程中的指标，同时楼主测试使用的流速一定要涵盖在检定范围中，比如：实际用1.0ml/min，检定范围是0.5 - 1.5 买ml/min；
2. 测试中使用的色谱柱（100或150mm，C18柱）是否正常：运行色谱柱使用手册上，柱子出厂质保书上的色谱参数，看一下柱效、保留时间是否同出厂时有明显差异；
通过以上方法排除仪器、色谱柱是否有故障后，再来找出峰很快的原因。
另外，楼主原先在岛津液相上用250mm C18柱，90%乙腈水溶液做流动相，换到Jasco HPLC上又用100或150mm C18柱，如果要保持出峰时间同原先一致，流动相中乙腈的比例、流速可能需要做相应的调整，需要提醒的是，有些C18色谱柱不适合用100%水，至少保持流动相中含有最低的有机溶剂比例，以免影响柱子性能。
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5楼2013-01-23 08:59:51
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13631569690

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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250mm的长柱　换成150mm或100mm短柱，本来出峰就会提前的，90：10流动相换成95：5同样会提前出峰，想出峰就换回长柱或提高水的比例就OK了
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2楼2013-01-23 08:46:03
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13631569690

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-01-23 10:36:32
Jireh: 金币+2, ★有帮助 2013-01-23 18:24:41
250mm的长柱　换成150mm或100mm短柱，本来出峰就会提前的，90：10流动相换成95：5同样会提前出峰，想出峰晚点就换回长柱或提高水的比例就OK了
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3楼2013-01-23 08:47:07
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hujychem

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-01-23 10:36:43
Jireh: 金币+2, ★有帮助 2013-01-23 18:27:14
1、检测出来的峰和进样峰完全重叠，在1.8min处就出峰了。==>这个是指在仪器上无论是更换柱子还是改变流动相比例，出峰时间都是1.8min？
2、如果要晚出峰，为何要更换更短的柱子呢？先用同规格柱子在这个仪器上试一下吧。
3、还有个疑问，如果保留时间由11min减少到1.8min，在流速相同的情况下，即使柱子变短也不会提前这么长时间出峰，有点儿像柱子对样品无保留时的出峰情况。
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4楼2013-01-23 08:49:44
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)

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crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-01-23 10:37:17
Jireh: 金币+1 2013-01-23 18:30:37
换过的新柱子，除了长度上变短外，和原来的色谱柱还有其他的什么区别没？例如填料经过修饰过，不适合你检测物质的分析。看楼主的流动相比例，检测物质极性较大，可采用亲水色谱柱分析
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6楼2013-01-23 10:16:02
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小明2007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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Jireh: 金币+1 2013-01-23 18:30:46
1，C18的柱子也是有区别的：可以看出你的样品在后面的那根C18柱子上面没有保留，考虑更换回原来的C18柱子型号；
2，柱子长度问题：柱子长了出峰时间慢。考虑换根长柱子；
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7楼2013-01-23 10:48:18
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Jireh

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 13631569690 at 2013-01-23 08:47:07
250mm的长柱　换成150mm或100mm短柱，本来出峰就会提前的，90：10流动相换成95：5同样会提前出峰，想出峰晚点就换回长柱或提高水的比例就OK了

新的实验室，没有长柱，老师也不赞成用长柱。。。
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8楼2013-01-23 18:24:31
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Jireh

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hujychem at 2013-01-23 08:49:44
1、检测出来的峰和进样峰完全重叠，在1.8min处就出峰了。==>这个是指在仪器上无论是更换柱子还是改变流动相比例，出峰时间都是1.8min？
2、如果要晚出峰，为何要更换更短的柱子呢？先用同规格柱子在这个仪器上试 ...

1，对，但柱子都是100mm的。
2，换柱子不太可能了。
3，对！但对照无光谱图，标准品有光谱图。。。
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9楼2013-01-23 18:28:35
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Jireh

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ruiyi1101 at 2013-01-23 08:59:51
1. 确认Jasco的HPLC，仪器是否正常：查阅最近一次仪器校验记录（一般每年至少一次），主要是流速检定项是否符合国家计量检定规程中的指标，同时楼主测试使用的流速一定要涵盖在检定范围中，比如：实际用1.0ml/min， ...

谢谢你的建议，故障全部排除，一切正常~
可能还是出在流动相的问题上，也谢谢提醒！看看这柱子是否经得起98%的水
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10楼2013-01-23 18:30:19
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