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[求助]
换了仪器和柱子后，HPLC标品出峰过早，求助。不甚感激~~~
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之前用岛津的HPLC紫外检测，250mm 普通的C18柱，用的是水：乙腈=90:10，检测的样品在11min出峰。一切很正常。 换了地方做实验，Jasco的HPLC DAD检测器（似乎更好了），用150mm或者100mm的C18柱，用相同的方法，或者水：乙腈=95:5，检测出来的峰和进样峰完全重叠，在1.8min处就出峰了。只不过相比起对照，峰更高，而且该标品的光谱图和文献的相比，很相似。大概能确定样品没有问题。 该仪器也运转正常，其他人的样品能跑的很好。 所以，现在的问题是，如何让样品出峰晚点阿？ 试过 好多次了，捉急死人了。。。求助各位大虾阿~~~ |
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【答案】应助回帖
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crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-01-23 10:36:43
Jireh: 金币+2, ★有帮助 2013-01-23 18:27:14
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1、检测出来的峰和进样峰完全重叠，在1.8min处就出峰了。==>这个是指在仪器上无论是更换柱子还是改变流动相比例，出峰时间都是1.8min？ 2、如果要晚出峰，为何要更换更短的柱子呢？先用同规格柱子在这个仪器上试一下吧。 3、还有个疑问，如果保留时间由11min减少到1.8min，在流速相同的情况下，即使柱子变短也不会提前这么长时间出峰，有点儿像柱子对样品无保留时的出峰情况。 |
4楼2013-01-23 08:49:44
2楼2013-01-23 08:46:03
3楼2013-01-23 08:47:07
【答案】应助回帖
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Jireh: 金币+3 2013-01-23 18:30:25
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Jireh: 金币+3 2013-01-23 18:30:25
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1. 确认Jasco的HPLC，仪器是否正常：查阅最近一次仪器校验记录（一般每年至少一次），主要是流速检定项是否符合国家计量检定规程中的指标，同时楼主测试使用的流速一定要涵盖在检定范围中，比如：实际用1.0ml/min，检定范围是0.5 - 1.5 买ml/min； 2. 测试中使用的色谱柱（100或150mm，C18柱）是否正常：运行色谱柱使用手册上，柱子出厂质保书上的色谱参数，看一下柱效、保留时间是否同出厂时有明显差异； 通过以上方法排除仪器、色谱柱是否有故障后，再来找出峰很快的原因。 另外，楼主原先在岛津液相上用250mm C18柱，90%乙腈水溶液做流动相，换到Jasco HPLC上又用100或150mm C18柱，如果要保持出峰时间同原先一致，流动相中乙腈的比例、流速可能需要做相应的调整，需要提醒的是，有些C18色谱柱不适合用100%水，至少保持流动相中含有最低的有机溶剂比例，以免影响柱子性能。 |
5楼2013-01-23 08:59:51
