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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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火舞精灵3

铜虫 (正式写手)

[交流] 引物设计 已有4人参与

我想从质粒中获取一段基因序列，设计引物（加酶切位点）
我该如何设计引物？
会不会导致出现扩增错误？如何提高试验的保真性？
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1楼 2013-01-19 16:27:09
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
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用质粒为模板就可以了。质粒几千bp，一般是不会有错配而导致非特意扩增的，只有基因组才会有这种可能。
有高保真酶就用高保真酶，片段不太长的话，没有也可以。
但不管用什么酶，克隆完后都需要测序验证。
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6楼2013-01-19 18:23:20
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这样说太笼统啦，你可以把什么质粒告诉大家，你自己可以先按自己的理解设计一对引物放上来，大家看看可不可行啊。
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2楼2013-01-19 16:35:45
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火舞精灵3

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopyzxx at 2013-01-19 16:35:45
这样说太笼统啦，你可以把什么质粒告诉大家，你自己可以先按自己的理解设计一对引物放上来，大家看看可不可行啊。

先前已经把目的基因（一段启动子序列）从植物cDNA文库中筛选出来（两端有酶切位点），连接在pMD18-T上。
   现在想换掉这两个酶切位点，改用其他的酶切位点。
用什么方式比较好呢？不会丢失碱基或错配
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3楼2013-01-19 16:42:48
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
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你把原来的引物换个酶切位点不就完了吗？怎么会错配呢？
肯定不会有问题。
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4楼2013-01-19 17:53:38
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